Bacillus megaterium M22'den lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Lipazlar (triaçilgliserol açilhidrolaz, EC. 3.1.1.3), mikro-sulu çevrede rol oynamaları ve hidroliz, esterifikasyon, transesterifikasyon (interesterifikasyon, aminoliz, asidoliz, alkoliz) reaksiyonlarını katalizleme yeteneklerine bağlı olarak endüstride geniş bir uygulama alanına sahiptir. Kimyasal olarak sentezi zor olan özel bileşiklerin üretimini stereo ve bölgesel spesifik özellikleri ile kolaylaştırmaları, ester bağına spesifik olmaları, geniş spektrumdaki substratları kullanabilme kabiliyetleri, yan ürün oluşumunu önlemeleri, hidrolitik reaksiyonları katalizlemek için kofaktöre ihtiyaç duymamaları ve organik çözücülerde aktifliklerini korumaları gibi özelliklerinden dolayı lipazlar, son yıllarda özel ilgi kazanmıştır. Yapılan bu çalışmada topraktan izole edilmiş yeni bir Bacillus megaterium M22'den lipaz enzimi saflaştırılarak karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. Lipaz enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi ve DEAE-selüloz anyon değiştirme kromatografisi ile % 34,42 verim ile 4 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile lipaz enziminin molekül kütlesi 45 kDa olarak tespit edilmiştir. Bacillus megaterium M22'den saflaştırılan lipaz enziminin optimum sıcaklığı 40 °C, optimum pH değeri ise 7,0 olarak belirlenmiştir. Metanol, toluen, benzen ve klorobenzen lipaz aktivitesini büyük ölçüde arttırmıştır. Çeşitli metallerin ise lipaz aktivitesini azalttığı gözlenmiştir. Lipaz enzimi üzerine ayrıca çeşitli reaktiflerin etkisi de incelenmiştir. Bacillus megaterium M22'den saflaştırılan lipaz enziminin Michaelis-Menten kinetik sabitleri olan Km ve Vmaks değerleri ise sırasıyla 4,74 µM ve 8,13 U/ml olarak tespit edilmiştir.