Bacillus subtilis megatherium bakteri türünden proteaz enziminin saflaştırılması ve özelliklerinin incelenmesi

Enzimler canlı organizmalar tarafından üretilen, önemli biyolojik reaksiyonların çalışma hızını etkileyen biyokatalizörlerdir. Enzim teknolojisi günümüzde hızla gelişmekte olup, çıkan ürünlerin çeşitliliği ve ekonomik değerlerinin yüksek olması sebebiyle hızla önem kazanmaktadır. Bu alanda kullanılan en önemli enzim proteazdır. Proteazlar deterjan, gıda, ilaç ve deri sanayisinde çok sık kullanılmaktadır. Enzimlerin %60'ından büyük bir payı mikroorganizma kaynaklıdır. Çalışmamızın amacı Bacillus subtilis megatherium bakterisinden proteaz enziminin saflaştırılması ve özelliklerinin belirlenmesidir. Çalışmanın ilk basamağında enzimin uygun şartlarda üretimi sağlanmıştır. Saflaştırma için diyaliz, amonyum sülfatla çöktürme ve DEAE-Sefaroz iyon değişim kromatografi yöntemleri yapılmıştır. İşlemler sonrasında ham homojenat spesifik aktivite 10.2 U/mg bulunmuştur. %80'lik çöktürme işleminden sonra çözelti spesifik aktivitesi 12.9 U/mg' dır. Doyurma sonrası 1.2 kat saflaştırma sağlanmıştır. Proteaz enziminin optimum sıcaklık, sıcaklık kararlılığı, optimum pH ve pH kararlılığı; reaksiyon üzerine inhibitör ve aktivatör etkisi, reaksiyonun süresine ve substratın etkisine bakılmış olup molekül ağırlığı tayini yapılmıştır.