Bakla (Vicia faba L.) polifenol oksidazının biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi

ÖZET BAKLA (Vicia faba L.) POLİFENOL OKSİDAZININ BİYOKİMYASAL ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ Bu çalışmada, Antalya İlinden toplanan Bakla'dan (Vicia faba L.) kısmen saflaştırılan polifenoloksidazın (PFO) biyokimyasal özellikleri incelendi. Bakla PFO' sunun doğal elektroforezde 2 tane izoenziminin olduğu tespit edildi. Enzimin en çok ilgi duyduğu substrat hidrokafeik asiti takiben 4-metilkatekol ve katekol olarak belirlendi. Hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında enzimin optimum sıcaklık değeri 30 °C olarak bulundu. Bakla PFO' sunun optimum pH değeri hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında, sırasıyla 8,0; 4,0 ve 4,0 olarak tespit edildi. Hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında Bakla PFO' sunun Km değeri, Lineweaver-Burk eğrisi ile, sırasıyla 0,172 mM; 7,133 mM ve 9,158 mM olarak hesaplandı. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, hidrokafeik asit substratı varlığında 10 günün sonunda, 30 ºC'de 10 gün sonra aktivitesinin % 77' sini koruduğu gözlendi. En yaygın PFO inhibitörleri olan askorbik asit, benzoik asit, sodyum azid ve sodyum metabisülfit için IC50 değeri sırası ile 8,25 µM; 11,00 mM; 60,00 mM ve 116,00 µM olarak belirlendi. Na+, K+, Ba+2, Mg+2, Mn+2, Hg+2, Ni+2, Cu+2, Ca+2 ve Fe+2 iyonlarının 1 mM; 5 mM ve 10 mM' lık son konsantrasyonda Bakla PFO'su üzerine inhibisyon etkisi incelendi.