Koagulaz negatif stafilokoklardan beta hemolizin geninin klonlanması ve biyolojik aktivitesinin gösterilmesi

Koagülaz negatif stafilokoklar (KNS) serbest plazma koagülaz üretememelerinden dolayı yakından ilişkili oldukları fakat onlardan daha virulent olan S. aureus'dan ayrılmaktadırlar. KNS'lar, damar içi araç enfeksiyonlarından kaynaklanan en yaygın bakteriyemi sebebidir. Günümüzde önemli türler olan S. epidermidis ve S. haemolyticus klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında hastane kaynaklı ana patojenleri temsil etmektedirler. Beta Hemolizin (hlb), S. epidermidis'in patogeneziyle ilişkili önemli bir virülans molekülü olarak hizmet etmektedir. Bu sitotoksin iki ayrı aksiyon mekanizmasına sahiptir. Bunlar: sfingomiyelinaz aktivitesi ve DNA biyofilm ligaz aktivitesi yani β-toksinin eksogenoz DNA varlığında kendisini çapraz bağlama yeteneğidir. Bu çalışmada, Beta Hemolizin (hlb) proteinin aktivitesini ele almak için diyabetik ayak enfeksiyonlarından (DFI) alınan örneklerden S. epidermidis suşları kullanılmıştır. hlb genini çoğaltmak için KpnI ve EcoRI restriksiyon bölgeleri eklenmiş modifiye primerler dizayn edilmiştir. Çoğaltılmış gen vektör olarak pUC19 plazmidi kullanılarak klonlanmış ve sekans analizine gönderilmiştir. Sekans sonuçlarına göre klonlandığımız gen, (Staphylococcus epidermidis strain Q47 sphingomyeline phosphodiesterase) genine 98.95% benzerlik göstermiştir. Kanlı agarda hemoliz testi yapılarak rekombinant protein varlığı doğrulanmıştır.