Astacus Leptodactylus türünde voltaj kapılı kalsiyum kanalına ait genlerinin klonlanması ve ilgili proteinlerin yapısal ve fonksiyonel özelliklerinin belirlenmesi

Voltaj kapılı kalsiyum kanalları, elektrik sinyali, kasılma salgısı ve gen ifadesi gibi birçok hücresel işlemlerin gerçekleşmesinde temel unsurlardır. Memeli türlerinde kalsiyum kanallarının işlevsel ve yapısal özellikleri hakkında oldukça fazla bilgi bulunmaktadır. Kerevit, birçok deney türü için model hayvan görevi görür. Ancak kerevitlerdeki kalsiyum kanallarının moleküler ve genetik özellikleri ile ilgili herhangi bir bilgi bulunmamaktadır. Konvansiyonel klonlama yöntemleri, üç boyutlu yapısal hesaplar, docking deneyleri yapılmıştır. 7791 bp boyutunda bir mRNA klonlanmıştır. Kodlama bölgesi, 1942 amino asitli bir alfa peptidine çevrilmiştir. Klonlanmış protein sekansı, komşu türlerden gelen diğer L-tipi voltaj kapılı kalsiyum kanalı sekansları ile benzerliğe sahiptir. Üç boyutlu yapı, insan L tipi voltaj kapılı kalsiyum kanalına göre hesaplanmıştır. Bilinen kalsiyum kanal blokerleri; nifedipin, verapamil ve diltiazem, hesaplanan üç boyutlu modele başarıyla bağlandı. NCBI platformundaki benzerlik analizi, üç boyutlu yapısal hesaplamalar ve docking deneyleri göz önüne alındığında, klonlanmış mRNA'nın kerevitte varsayılan voltaj kapılı kalsiyum kanalı proteini için bir alfa peptidi kodladığı sonucuna varıldı. Mevcut çalışmada, geleneksel moleküler biyoloji yöntemleri kullanılarak, varsayılan voltaj kapılı kalsiyum kanalını kodlayan mRNA tam olarak de novo klonlanmıştır. İlgili proteinin üç boyutlu yapısı hesaplanmıştır ve kanalı bloke eden birkaç farmakolojik ajan belirlenen reseptör bölgelerine yerleştirilmiştir.