Surface imprinted silica particles for concanavalin A purification

Concanavalin A (Con A) lektin olarak bilinen bitki protein grubu üyesidir. Çoğu lektin proteinleri hücre bölünmesi ve hücre yüzeyi araştırma çalışmalarında faydalıdır. Con A genelde afinite kromatografi araştırmalarında karbohidrat içeren yapıların saflaştırılması ve karakterizasyonu için kullanılmaktadır. Bu çalışmada çekirdek kabuk yüzey baskılama yöntemini kullanarak Con A saflaştırılması için spesifik adsorbent tasarlanmıştır. Con A molekülüne karşı yüzey moleküler baskılanmış polimer olarak silika mikroküreler kullanılmıştır. Silika yüzeyi asit ile işlenmiş ve sonrasında 3-metakriloiloksipropil trimetoksisilan (MPTMS) ile modifiye edilmiştir. Con A moleküllerini silika partiküllerin yüzeyine baskılamak için N-metakriloil-L-histidin metil ester fonksiyonel monomer olarak kullanılmıştır. Çekirdek-kabuk silika partikülleri Zeta Size, SEM cihazı ve FTIR spektroskopi ile incelenmiştir. pH, Con A derişimi ve sıcaklık gibi parametrelerin Con A adsorpsiyonuna etkileri test edilmiş ve hesaplanmıştır. Con A adsorpsyonunun ilerlemesini incelemek için zaman taraması yapılmıştır. 1.0 M NaCl çözeltisi desorpsiyon ajanı olarak kullanılmıştır. Moleküler baskılanmış polimerlerin etkisini görmek için aynı yöntem ile moleküler baskılanmamış polimerler hazırlanıp test edilmiştir. Ayrıca Con A baskılanmış partiküllerin bağlanma boşluklarının seçiciliğini araştırmak için lizozim ve hemoglobin molekülleri kullanılmıştır. Baskılanmış silika partiküllerin seçiciliği Con A içeren Jack Bean (fasulye) özütünü kullanarak incelenmiştir. Con A'nın saflığı sodyum dodesil sülfat poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile incelenmiştir. Son olarak Con A baskılanmış silika partiküllerin tekrar kullanılabilirliği 10 gün boyunca ardarda kullanarak seçiciliğin değişmemesi ile ıspatlanmıştır. Anahtar Kelimeler: Concanavalin A, lektinler, moleküler baskılanmış polimerler, silika partiküller.