D398S, I323V, I372Q/V VE V380F mutasyonlarının Anoxybacillus gonensis glukoz izomerazının kinetik parametreleri ve ısıl kararlılığı üzerine olan etkisinin araştırılması

Glukozun fruktoza isomerizasyonunu katalizleyen glukoz izomeraz (D- xylose ketol - isomerase E.C 5.3.1.5) birçok mikroorganizmada bulunmaktadır. Günümüze kadar birçok termofilik bakteriden GI' lar karakterize edilerek birçoğu endüstriyel alanlarda kullanılır hale getirilmiştir. Ayrıca endüstriyel alanlarda kullanılmak üzere birçok GI geni biyomühendislik uygulamaları ile mutant hale getirilerek GI' ın hem kinetik hem de biyokimyasal parametrelerinin geliştirilmesi üzerine birçok çalışma yapılmıştır. Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazı rekombinant olarak izole edilmiştir. Elde edilen veriler sonucunda; Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazının kinetik parametreler açısından ticari olarak kullanılan birçok GI' dan üstün nitelikler taşıdığı belirlenmiştir. Bu çalışmada, genetik manipülasyonlarla kinetik özellikleri geliştirilmiş olan AgoGI' sının yine aynı yöntemler ile biyokimyasal ve kinetik parametrelerinin geliştirilmesi amaçlanmaktadır. Bu amaçla AgoGI' sı üzerinde I323V, I372V, I372Q, V380F, D398S, bölge spesifik mutasyonları uygulanmıştır. Ayrıca, başarılı sonuç alınan I373V ve V380F mutasyonları kinetik parametreler açısından geliştirilmiş olan enzimin W137F/ V184S mutantı üzerinde de uygulanmıştır. W137F/ V184S/I372V' ye ait kinetik veriler; Km değeri 64,37 ± 1,3 mM, Vmax değeri 99,05 ± 0,44, kcat değeri 82,62 1/sn ve kcat/ Km değeri 1,283 olarak hesaplanmıştır. W137F/ V184S/W380F' ye ait kinetik veriler ise Km değeri 116,57 ± 4,37 mM, Vmax değeri 37,22 ± 0,39 µmol/dk/mg protein, kcat değeri 31,05 1/sn ve kcat/ Km değeri 0,266 olarak hesaplandı.