Elektrokimyasal alfa-fetoprotein immünosensörünün geliştirilmesi

Bu araştırmada, bir kanser biyobelirteci olan alfa-fetoproteinin (AFP) elektrokimyasal tayini için yeni bir immünosensör geliştirilmiş ve kan serumu (insan kanı) numunelerinde uygulaması gerçekleştirilmiştir. Çalışmada yüzey baskılı karbon elektrotlar (SPCE) ilk olarak indirgenmiş grafen oksit (RGO) ile modifiye edilmiş ardından elektropolimerizasyon tekniği uygulanarak elektrot yüzeyi polinötral kırmızı ile kaplanmış, son olarak elektrodepozisyon ile altın nanoparçacıklar (AuNP) yüzeyde oluşturulmuştur. SPCE/RGO/PNR/AuNP elektrodunun elektrokimyasal karakterizasyonu dönüşümlü voltametri (CV), diferansiyel puls voltametri (DPV) ve kare dalga voltametri (SWV) metotları kullanılarak yapılmıştır. SPCE/RGO/PNR/AuNP elektrotların yüzeyine Anti-AFP'nin immobilizasyonu 3-merkaptopropiyonik asit (3-MPA) ve 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil) karbodiimid/N-hidroksisüksinimid (EDC/NHS) kullanılarak kovalent bağlama yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Hazırlanan AFP immünosensörünün optimum çalışma parametreleri DPV ve SWV metotları ile belirlenmiş ve optimum anti-AFP konsantrasyonu 50,0 µg/mL, optimum anti-AFP inkübasyon süresi 60 dk ve optimum AFP inkübasyon süresi 15 dk olarak bulunmuştur. Optimum şartlarda elektrokimyasal AFP immünosensörünün analitiksel karakterizasyonu yapılmıştır. DPV ve SWV metotları ile belirlenen doğrusal tayin aralıkları 1-500 ng.mL-1, tespit limitleri sırasıyla 6,51 ng.mL-1 ve 9,68 ng.mL-1 olarak belirlenmiştir. AFP immünosensörünün tekrarlanabilirliği 50 ng.mL-1 AFP konsantrasyonu için test edilmiş ve bağıl standart sapma (R.S.D.) değerleri DPV ve SWV metotları için sırasıyla %4,06 (n=10) ve %3,68 (n=10) olarak hesaplanmıştır. Geliştirilen AFP immünosensörünün uygulama kararlığı 60 gün boyunca, depolama kararlığı ise 12 hafta depolama süresince voltametrik metotlarla incelenmiştir. AFP immünosensörünün seçiciliği 9 farklı antijen karışımı varlığında AFP analizinin yapılmasıyla test edilmiş ve antijen karışımının %4,02'lik bir girişim yaptığı bulunmuştur. Hazırlanan AFP immünosensörleri yapay kan serumu (insan kanı) örneklerine bilinen miktarda ilave edilen farklı konsantrasyonlardaki AFP'nin analizi için kullanılmış ve %95'in üstünde geri kazanımlar elde edilmiştir.