Tümör-stroma etkileşimini hedef alan antikorlar üretmek için sistemlerin geliştirilmesi

Kanser hücreleri, tümör mikroçevrelerini (TME) adaptasyonlarını kolaylaştıracak şekilde programlayabilir ve böylece kanser sağ kalımını, ilerlemesini ve metastazını etkileyebilir. Bu bağlamda, stroma bileşenlerini ve çeşitli kanser türlerindeki rollerini açıklamak ve tanı, tedavi ve takipteki potansiyel uygulamalarını araştırmak çok önemlidir. Daha önce, kanser kaynaklı salgılanan faktörlerin, sitokinlerin, stromal otofajiyi ve kanser-stroma sinyalleşmesini düzenleyerek tümör kaderini değiştirdiğini gösterilmiştir. Bu tez, tümör mikroçevresindeki sitokinleri hedef alan antikor bazlı ilaçlar üretmek için sistemler geliştirmeyi amaçlamaktadır. Bunu başarmak için, rekombinant sitokinler üretmek için sistemler geliştirdik ve bir fare tek zincirli değişken fragman (scFv) kütüphanesi oluşturduk. Bunları elde etmek için öncelikle sitokinlerin cDNA'sını pGEX4T2 ve pGEX4T1-3xFLAG dahil olmak üzere farklı IPTG ile indüklenebilir, lac-promotör içeren vektörlere klonladık. Pozitif klonlarımızı doğruladık ve BL21 E. coli hücreleri kullanarak rekombinant GST ve GST-FLAG etiketli sitokinler üretmek için protokolleri daha da optimize ettik. İkinci bölümde, protokolleri optimize etmeye ve faj görüntüleme teknolojisiyle rekombinant scFv antikorları oluşturmaya odaklanıldı. Bu nedenle, öncelikle antikor değişken hafif (VL) ve değişken ağır (VH) zincirlerinin dizilerini belirledik. Çeşitli bir scFv antikor kütüphanesi oluşturmak için, VL ve VH fragmanları üretmek üzere en az 36 oligo tasarladık. Fragmanlar, SOE-PCR (örtüşme uzatma yoluyla ekleme) ile daha da birleştirildi ve rekombinant sitokinlere karşı daha ileri faj görüntüleme çalışmaları için pCANTAB-5E faj görüntüleme plazmidine klonlandı. Genel olarak, rekombinant sitokinler ve rekombinant scFv antikorları üretmek için sistemler oluşturduk. Bu çalışma, tümör stromasında spesifik sitokinleri hedef alan yeni, spesifik ve ilaç potansiyeline sahip antikorların keşfine yol açabilir ve potansiyel olarak yeni bir kanser tedavisi olarak kullanılabilir.