Elektrokimyasal CA 125 immünosensörünün geliştirilmesi

Bu araştırmada, bir kanser biyobelirteci olan kanser antijen 125'in (CA 125) elektrokimyasal tayini için yeni bir immünosensör geliştirilmiş ve insan kan serumu numunelerinde uygulaması gerçekleştirilmiştir. Çalışmada yüzey baskılı karbon elektrotlar (SPCE) ilk olarak indirgenmiş grafen oksit (RGO) ile modifiye edilmiş ardından elektropolimerizasyon tekniği uygulanarak elektrot yüzeyi politiyonin ile kaplanmış, son olarak elektrodepozisyon ile altın nanoparçacıklar (AuNP) yüzeyde oluşturulmuştur. SPCE/RGO/PTH/AuNP elektrodunun elektrokimyasal karakterizasyonu dönüşümlü voltametri (CV), diferansiyel puls voltametri (DPV), kare dalga voltametri (SWV) ve elektrokimyasal empedans spektroskopisi (EIS) metotları kullanılarak yapılmıştır. SPCE/RGO/PTH/AuNP elektrotların yüzeyine Anti-CA 125'nin immobilizasyonu 3-merkaptopropiyonik asit (3-MPA) ve 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil) karbodiimid/N-hidroksisüksinimid (EDC/NHS) kullanılarak kovalent bağlama yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Hazırlanan CA 125 immünosensörünün optimum çalışma parametreleri DPV ve EIS metotları ile belirlenmiş ve optimum Anti-CA 125 konsantrasyonu 66,66 µg/mL, optimum Anti-CA 125 inkübasyon süresi 45 dk ve optimum CA 125 inkübasyon süresi 30 dk olarak bulunmuştur. Optimum şartlarda elektrokimyasal CA 125 immünosensörünün analitiksel karakterizasyonu yapılmıştır. EIS, DPV ve SWV metotları ile belirlenen doğrusal tayin aralıkları 1-100 pg.mL-1, tespit limitleri sırasıyla 0,0012 ng.mL-1, 1,61 pg.mL-1 ve 1,68 pg.mL-1 olarak belirlenmiştir. CA 125 immünosensörünün tekrarlanabilirliği 50 ng.mL-1 CA 125 konsantrasyou için test edilmiş ve bağıl standart sapma (R.S.D.) değerleri EIS, DPV ve SWV metotları için sırasıyla %3,34 (n=10), %2,03 (n=10) ve %1,48 (n=10) olarak hesaplanmıştır. Geliştirilen CA 125 immünosensörünün uygulama kararlığı 60 gün boyunca, depolama kararlığı ise 12 hafta depolama süresince voltametrik metotlarla incelenmiştir. CA 125 immünosensörünün seçiciliği 9 farklı antijen karışımı varlığında CA 125'in analizinin yapılmasıyla test edilmiş ve antijen karışımının % 4,97'lik bir girişim yaptığı bulunmuştur. Hazırlanan CA 125 immünosensörleri insan kan serumu örneklerine bilinen miktarda ilave edilen farklı konsantrasyonlardaki CA 125'in analizi için kullanılmış ve %95'in üstünde geri kazanımlar elde edilmiştir.