Preparation of fab fragment immobilized immunoaffinity cryogels and albumin purification

585 aminoasitli tek bir zincirden oluşan albümin karaciğerde sentez edilir. İnsan ve diğer memeli hayvanların kan plazmasında bulunan en yaygın proteindir. Kanda bulunan proteinlerin %60'ını oluşturur. Ayrıca, doku sıvılarında, özellikle kas ve deride, az miktarda gözyaşı, ter, mide suları ve safrada da bulunur. Vücuttaki toplam albüminin %30-40'ı kandadır. Yağ asitleri ve çeşitli başka maddeleri kanda taşımasının yanı sıra en önemli işlevi, kan ile doku sıvıları arasında suyun dengelenmesini sağlamaktır. Albumin kandaki onkotik basıncı düzenleyen ve dokular arası madde alışverişini sağlayan taşıyıcı proteindir. Afinite kromatografisinde söz konusu etkileşim antikorların antijenlerle, enzimlerin substrat anologlarıyla ve de hormonların reseptörleri ile olan etkileşimleri türündendir. Afinite kromatografisinin bir çeşidi olan immunoafinite kromatografisi son yıllarda sıklıkla kullanılan kromatografik bir tekniktir. İmmunoafinite kromatografisinde ligand olarak kullanılan antikorlar antijenlerin saflaştırılmasında kullanılır. Bu çalışma kapsamında insan serum albümin (HSA) saflaştırılması için Fab fragmenti immobilize edilmiş kriyojel kolonlar hazırlanmıştır. Bu amaçla öncelikle anti insan serum albümini (Anti-HSA) moleküllerinin papain enzimi ile enzimatik hidrolizi gerçekleştirilmiş ve bunun sonucunda elde edilen Fab fragmenti kriyojel kolon içerisine immobilize edilmiştir. Kontrol amaçlı Fab fragmenti immobilize edilmemiş PHEMAC kriyojel kolonu da hazırlanmıştır. Hazırlanan kolonların karakterizasyon çalışması (SEM, BET, FTIR-ATR, şişme) yapılmıştır. Daha sonra albümin saflaştırılması işleminde çeşitli parametrelerin (pH taraması, derişim, akış hızı vs.) etkisi incelenmiştir. HSA seçiciliği Fab bölgesindeki değişimlere bağlı olduğu için, molekülün bütününü immobilize etmektense antijen bağlanmasından asıl sorumlu olan işlevsel Fab bölgesi immobilize edilmiştir. Bu sayede hem immobilizasyon işlemi kolaylaştırılmış, hem de kolonun etkinliği arttırılmıştır. PHEMA temelli kriyojeller proteinlerle biyouyumluluk göstermektedir. Çalışma kapsamında sulu çözeltiden seçici bir şekilde HSA saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Anahtar Kelimeler: Kriyojel, İmmunoafinite Kromatografisi, İnsan Serum Albümini, Anti İnsan Serum Albümini.