Determination of the relationship between C-ABL tyrosine kinase and yap in response to DNA damage in mouse granulosa cells

Granüloza hücreleri, ovaryumda oositin olgunlaşması için gerekli olan fiziksel desteği ve mikro ortamı sağlayan birincil hücre tipidir. Granüloza hücre proliferasyonu, sağlıklı bir folikülün gelişimi, olgunlaşması, ovulasyonu ve atrezi mekanizması için çok önemlidir. Yes ile ilişkili protein (YAP), Hippo sinyal yolağı inaktif hale geldiğinde çekirdeğe yerleşerek aktif hale gelmektedir. Abelson tirozin kinaz (c-Abl) ise DNA hasarı ile aktive edilebilen ve apoptoz, stres yanıtı ve adhezyon gibi hücresel olaylarda işlev gören bir tirozin kinaz türü olarak bilinmektedir. DNA hasarı altında, c-Abl'in YAP'ın onkojenik fonksiyonunu tümör baskılayıcı fonksiyona değiştirdiği bilinmektedir. Bu tez çalışmasında fare granüloza hücrelerinde 2.5μM,5μM,10μM,20μM ve 50μM hidrojen peroksit (H2O2) konsantrasyonlarına ve 100μM, 200μM, 400μM hidrojen peroksit konsantrasyonlarına yanıt olarak c-Abl ve YAP ekspresyonundaki değişiklikleri çift immunofloresan boyama yöntemi ve western blot yöntemi ile ortaya koymayı amaçladık. Elde edilen sonuçlar doğrultusunda, c-Abl'in nükleer ekspresyonunun 5μM, 10μM, 20μM, 50μM şeklinde artan hidrojen peroksit ile muamele edilen granüloza hücrelerinde kontrole kıyasla azaldığı ortaya çıktı. Benzer şekilde c-Abl'in nükleer ekspresyonu, artan hidrojen peroksit konsantrasyonlarına yanıt olarak sitoplazmik c-Abl'in aktive edilebileceği anlamına gelen pozitif kontrol ile karşılaştırıldğında 100 μM, 200 μM ve 400 μM hidrojen peroksit ile muamele edilmiş granüloza hücrelerinde de azalmıştır. Sonuçlara göre bu sitoplazmik c-Abl aktivitesi, normal granüloza hücrelerinde nükleer YAP seviyesinin korunmasına ve p73 ekspresyonunun artmasına neden olmuştur. Bulgularımız, oksidatif stres ile c-Abl/YAP aktivasyonuna bağlı granüloza hücrelerinin çoğalması, göçü ve apoptozu arasındaki boşluğu doldurabilmek için c-Abl ve YAP arasındaki sinyal ilişkisinin belirlenmesinin oldukça önemli olduğunu göstermiştir. Anahtar kelimeler: Granulosa cell (GC), Yes-associated protein (YAP), Abelson tyrosine kinase (c-Abl), Hydrogen peroxide (H2O2)