Determination of the relationship between c-Abl protein tyrosine kinase and yap in cell fate determination during mouse preimplantation embryonic development

Zigot aşamasındaki embriyonun blastokiste gelişim sürecinde polarizasyon, kompaktlaşma ve hücre kaderinin belirlenmesi olaylarının başarıyla tamamlanması gerekmektedir. c-Abl, hücrede çekirdek ve sitoplazmada lokalize olan ve ayrıca çekirdek ile sitoplazma arasında taşınabilen bir tirozin kinazdır. c-Abl aracılı YAP1 fosforilasyonunun p73'ün aktivasyonundaki önemi belirlenmiş olmasına rağmen, c- Abl/YAP/p73 mekanizmasının preimplantasyon dönemi embriyo gelişimindeki rolü belirsizliğini korumaktadır.Tez çalışmamızda c-Abl tirozin kinazın, fare preimplantasyon dönemi embriyo gelişiminde c-Abl/YAP/p73 kaskadının polarizasyon, kompaktlaşma ve hücre kaderinin belirlenmesindeki fonksiyonel rolünü araştırmayı amaçladık. 6-8 haftalık C57BL6 dişi fareler, 7,5 IU PMSG ve 48 saat sonra 7,5 IU hCG hormonu verilerek süperovulasyon yapıldı ve ardından erkek fareler ile çiftleştirildi. hCG enjeksiyonundan 20 saat sonra zigot aşamasındaki embriyolar toplanarak kültüre edildi. Tez çalışmamızda temel olarak 4 grup tasarladık: Kontrol, PDGF-AA uygulaması yapılan, imatinib uygulaması yapılan ve c-Abl siRNA mikroenjeksiyonu gerçekleştirilen gruplar. Tüm deney gruplarından elde edilen embriyolarda morfolojik ve morfokinetik parametreler, blastomer alan ölçümleri ve apoptotik cisimler değerlendirildi. c-Abl, YAP, p-c-Abl, p- Y AP , p73, TEAD4, Pard6, E-cadherin, CDX2 ve NANOG lokalizasyonu immünofloresan yötemi ile belirlendi ve konfokal mikroskopta görüntülendi. qRT-PCR yöntemi kullanarak c-Abl, Yap, trofoektodermal hücre belirteçleri Tead ve Cdx2, iç hücre belirteçleri Oct4 ve Nanog ekspresyonunu mRNA düzeyinde belirledik. Tez çalışmamızda ilk kez, preimplantasyon dönemi embriyo gelişim sürecinde c- Abl/YAP/p73 sinyal yolağı mekanizması gösterildi. Sonuçlarımız; c-Abl tirozin kinazın, fare preimplantasyon dönemi embriyo gelişiminde polarizasyon, kompaktlaşma ve hücre kaderinin belirlenmesinde morfokinetik ve morfodinamik özellikler üzerinde düzenleyici bir role sahip olabileceğine dair yeni bilgiler sunmaktadır. Bu çalışma Yeditepe Üniversitesi Araştırma Projeleri ve Bilimsel Faaliyetleri Destekleme Komisyonu tarafından desteklenmiştir (Proje No: YAP-AP-SAB-21019).