Farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından üretilen deglikosile edilmiş PA83 antijeninin ekspresyon seviyelerinin karşılaştırılması

Son yıllarda, rekombinant proteinler için üretim konakçıları olarak bitkiler seçilmektedir. Sebepler açıktır - bitkiler hayvan ve insan patojenleri içermez, N-bağlı glikosilasyon dahil olmak üzere ökaryotik tip posttranslasyonel modifikasyonlar sağlar ve protein üretimi için neredeyse sınırsız ölçeklenebilirlik sunar. Bu teknoloji, bitki bazlı üretimin ölçeklendirilebilirliği, saflaştırma maliyetleri, verim, istenen glikosilasyon modelinin mühendisliği ve diğer konular dahil olmak üzere, üretim konağı olarak bitkilerin ekonomik, teknik ve güvenlik yönlerini ele almaktadır. Bacillus anthracis'in ölümcül bir biyolojik silah olarak başarılı bir şekilde kullanılması şarbona karşı daha etkili aşıların geliştirilmesinde araştırma ilgisini yeniden başlatmıştır. Bitki bazlı aşılar aşı üretimi için güvenli bir alternatif sunar. B. anthracis'in koruyucu antijeni (PA) şarbon toksininin önemli bir bileşenidir, ancak bir glikoprotein değildir.Bununla birlikte, dizisinin dokuz potansiyel glikosilasyon sahası vardır ve Nicotiana benthamiana bitkilerinde eksprese edildiğinde anormal şekilde glikosile olduğu gösterilmiştir. Son zamanlarda PA83 antijeninin glikozillenmemiş versiyonları, ya in vivo deglikolizasyon stratejisi (PNGase F veya Endo H temelli), (Mamedov vd. 2012; Mamedov vd. 2016; Mamedov vd. 2017) ya da mutasyon (6 tane N-glikolizasyon bölgesine yönlendirilmiş mutagenez), (Mamedov vd. 2016) yaklaşımı vasıtasıyla üretilebilmiştir. Bu çalışmada, farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından üretilen deglikosile edilmiş PA83 antijeninin ekspresyon seviyeleri karşılaştırılarak yeni Şarbon aşısı adayları belirlenmiştir. Yedi N-glikosilasyon sahasının (Asn-39 dahil) koruyucu antijeninin mutasyonu ile tasarlanmış ve kodon optimizasyonu yapılmış olan mutant formu,( Mamedov vd. 2017) farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından eksprese edildi ve N. benthamiana bitkisinde üretildi.Üretilen PA83'ün deglikosile edilmiş antijenleri, IMAC afinite kolonu kromatografi yöntemi kullanılarak saflaştırıldı ve saflaştırılmış protein stabilite analizleri için değerlendirildi.