Farklı platformların vero hücre hattı proliferasyonu ve ace2 gen ekspresyonu üzerine etkisinin belirlenmesi

ACE-2 proteini 805 aminoasitlik, dipeptidil karboksidipeptidazların anjiyotensin dönüştürücü enzim ailesine ait bir tip I integral membran proteinidir ve X kromozomu üzerinde Xp22.2 pozisyonunda bulunan ace2 geni tarafından kodlanır. Proteinin bir hücre dışı domaini, tek bir transmembran domaini ve bir sitoplazmik kuyruğu bulunur. ACE-2 insan vücudundaki birçok dokuda eksprese edildiği gibi fareler, gelincikler ve altın hamsterlarda da bulunmaktadır. ACE-2, SARS-CoV-2'nin hücreye giriş reseptörüdür. Virüs, spike proteininin reseptör bağlanma domaini (RBD) aracılığıyla ACE-2'ye bağlanarak membran fizyonunu başlatır. Vero hücresi, Afrika yeşil maymununun böbrek epitel hücrelerinden hazırlanan ve sürekli çoğalma yeteneği sahip olan devamlı hücre hattıdır. Esas olarak tip I interferon genlerinde bir delesyon içerirler, dolayısıyla interferon alfa veya beta üretemezler, bu da onları viral enfeksiyona karşı daha duyarlı hale getirir. Bu nedenle bir dizi virüsü incelemek ve insan aşılarının hazırlanmasında da kullanılmışlardır. Bu tez kapsamında COVİD-19 aşı üretimi için kullanılmakta olan konak hücresi (Vero), stasyoner kültür ve mikrotaşıyıcılı süspanse kültürde üretilmiştir. Üretim sonunda virüs bağlanma reseptörü olan ace2 ifadesi üretim modelleri karşılaştırılmıştır. Bulgular incelendiğinde her iki kültürde üretilen Vero hücrelerinde ACE-2 reseptörü varlığı, yapılan konvensiyonel PCR analizleri ile doğrulanmıştır. RT-PCR sonuçları ΔΔCT ile hesaplandığında benzer sonuçlar elde edilmiştir. Sonuç olarak mikrotaşıyıcılı süspanse kültürlerinin ACE-2 ekspresyonu üzerinde negatif bir etkiye sahip olmadığını ve aşı üretimde kullanılmasını doğrulamıştır.