Genetik mühendisliği teknikleri ile yem katkısı balık probiyotiklerinin oluşturulması

Yapılan bu tez çalışmasında, su ürünlerinde yemden kaliteli bir şekilde yararlanmak, canlı ağırlık kazancını artırmak ve bağışıklık sisteminin güçlenmesini sağlamak için yem katkısı balık probiyotiklerinin oluşturulmasında iyi bir kaynak olan β-Glukan kullanılmıştır. β-Glukan yulaf ve arpa gibi tahılların hücre duvarlarının önemli bir bileşenidir. 1,3-1,4-D-glukan 4-glukanhidrolaz (β-glukanaz; likenaz) (EC 3.2.1.73), β-glukanları hidrolize edebilme yeteneğine sahip bir enzimdir. Bu çalışmada, Streptococcus bovis genomuna ait β (1,3-1,4) glukanaz (likenaz) genini taşıyan rekombinant vektör pNW33N, elektroporasyon yoluyla Bacillus subtilis RSKK246 (CMCase +) suşuna aktarılmıştır. Daha sonra, likenan içeren LB-agar plakaları üzerinde elektrotransformasyon yapılmış ve congo kırmızısı ile boyanarak rekombinant B. subtilis RSKK246 kolonilerinin enzimatik aktivite bölgeleri gözlenmiştir. Ayrıca, rekombinant vektör pNW33N/Likenaz'dan elde edilen DNA hem BamHI hem de HindIII endonükleazları ile kesilerek likenaz geni (1800 bp) agaroz jel üzerinde gözlenmiştir. Diğer taraftan, rekombinant B. subtilis RSKK246 suşunun toplam hücre dışı proteinleri, vahşi tip suşu ile karşılaştırılmıştır. Son olarak, rekombinant enzimin 26 kDa'ya karşılık gelen protein bandı zimogram analizi ile gözlenmiştir. Bu sonuçlar, β (1,3-1,4) glukanaz geninin B. subtilis RSKK246 suşuna başarıyla eksprese edildiğini göstermektedir.