Glutatyon redüktaz enziminin biberiye bitkisinden ekstraksiyonu ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, glutatyon redüktaz enzimi (Glutatyon: NADP+, oksidoredüktaz, E.C. 1.8.1.7: GR) biberiye (Rosmarinus officinalis L.) bitkisinden ekstra edilerek üçlü faz saflaştırma yönteminin optimize edilmesi ile %54,80 verimle 18 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılan biberiye GR enzimi molekül ağırlığı SDS-PAGE ile yaklaşık olarak 75 kDa tek band olarak görüntülenmiştir. Enzim karakterizasyon çalışmalarında optimum iyonik şiddet, sıcaklık, pH ve kinetik özelliği araştırılmıştır. Sonuçlar sırasıyla; 400 mM fosfat tamponu, 60°C, 7,5 ve NADPH substratı Km değeri 0,047 mM; Vmaks ise 0,0033 EÜ/mL bulunurken, GSSG subsratı Km değeri 0,029 mM; Vmaks ise 0,0019 EÜ/mL şeklinde bulunmuştur. Magnezyum, cıva, kobalt, demir, nikel, kurşun, baryum, mangan, alüminyum ve kalsiyum metallerinin enzim aktivitesi üzerine etkileri araştırılmıştır. Bu metallerden Mg2+, Mn2+ ve Al3+ metalleri enzim aktivitesinde artışa yol açarken, diğer çoğu metal ise inhibitör etki sergilemiştir. Depolanma kararlılığı sonucunda ise enzimin uzun vadede dayanıklı olmadığı gözlenmiştir. Buna ilaveten biberiye bitkisi GR enzimi üzerine GSH'ın inhibisyon etkisi incelenmiş ve GSH için Lineweaver-Burk grafiği yardımıyla Ki sabiti 38,03 mM olarak bulunmuştur.