Haşhaş (Papaver somniferum L.) Tohumundan Lipaz Enziminin Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Lipazlar trigliseritlerin hidrolizini sağlayan enzimlerdir. Teknolojinin gelişmesiyle lipazların kullanım alanları artmış olup, lipaz saflaştırma büyük önem kazanmıştır. Bunula birlikte saflaştırma çalışmaları da artmıştır. Bu çalışmada haşhaş (Papaver somniferum L.) tohumu lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu amaçlanmıştır. İlk defa haşhaş tohumundan lipaz elde edilmiştir. Haşhaş tohumu proteinlerinde yağsızlaştırma işlemiyle yağların uzaklaştırılmasından sonra amonyum sülfat çöktürmesi ve jel filtrasyon kromatografisi yöntemlerinin kullanılmasıyla lipaz saflaştırılmıştır. Bu çalışmaların sonunda haşhaş tohumu lipazı 16,203 EU/mg protein, spesifik aktivite % 5,30 verim ile 22,29 kat saflaştırıldığı gözlenmiştir. Saflaştırılmış olan lipaz enziminde optimum pH 13,2 optimum sıcaklığı 60 ºC olarak tespit edilmiştir. Stabil pH 7,2 ve stabil sıcaklık 4 °C olarak belirlenmiştir. Haşhaş tohumu lipazının iki hafta süresince aktivite ölçümleri yapılarak depo kararlılığı belirlenmiştir. İki haftanın sonunda 4 °C'de enzimin aktivitesinin % 61 oranında korunduğu gözlenmiştir. Haşhaş tohumu lipazında substrat olarak triolein kullanılmış olup, Km ve Vmax değerleri hesaplanmıştır. Bu hesaplamanın sonucunda Km 0,678 mM ve Vmax 16,949 U/dk.mg enzim olarak bulunmuştur. Anahtar Kelimeler: Karakterizasyon, lipaz, haşhaş tohumu, saflaştırma.