Hepatosellüler kanserde MIR100HG'nin SP1 transkripsiyon faktörü ile regülasyonu

MIR100HG, kanser biyolojisinde önemli etkileri olan uzun kodlamayan bir RNA (lncRNA) olup, çeşitli kanser türlerinde yüksek düzeyde ifade edildiği gösterilmiştir. Bu tez kapsamında, MIR100HG'nin aşırı ekspresyonu ve baskılanmasının normoksik ve hipoksik koşullardaki hücresel etkileri, MIR100HG'nin SP1 tarafından transkripsiyonel aktivitesinin belirlenmesi ve MIR100HG promotorunda SP1 bağlanma bölgelerinin ChIP deneyi ile doğrulanması, SP1'in normoksik ve hipoksik koşullarda hücresel ve moleküler etkilerinin belirlenmesi amaçlanmaktadır. Hep3B hücrelerinde MIR100HG'nin aşırı ekspresyonu ve kalıcı baskılanması mRNA seviyesinde doğrulanmıştır. Normoksik ve hipoksik koşullarda, MIR100HG'nin aşırı ifadesinin hücre proliferasyonunu, hücre göçünü, koloni oluşturma yeteneğini ve invazyon yeteneğini arttırdığı gösterilmiştir. Aynı şekilde korele olarak MIR100HG shRNA ile lentiviral tabanlı kalıcı olarak ifadesinin baskılanması normoksik ve hipoksik koşullarda, hücre proliferasyonunu, hücre göçünü, koloni oluşturma yeteneğini ve invazyon yeteneğini azalttığı gösterilmiştir. MIR100HG promotorunda biyoinformatik olarak çok sayıda bağlanma bölgeleri bulunan SP1 transkripsiyon faktörünün MIR100HG transkripsiyonel regülasyonuna etkileri de incelenmiştir. SP1 aşırı ifadesinin 5' kısaltılarak oluşturulmuş MIR100HG promotor parçalarının aktivitesini arttırdığı belirlenmiştir. Aynı artış mRNA düzeyinde qRT-PCR ile doğrulanmıştır. DNA-protein etkileşim deneyi olan ChIP ile SP1 transkripsiyon faktörünün -260/+56 bölgelerine bağlandığı belirlenmiştir. Hep3B hücrelerinde SP1'in aşırı ekspresyonu ve kalıcı baskılanması, normoksik ve hipoksik koşullarda moleküler ve hücresel düzeyde analiz edilmiştir. SP1'in aşırı ekspresyonu ve baskılanması mRNA ve protein düzeyinde doğrulanmıştır. SP1 aşırı ifadesinde ve kalıcı baskılanmasında metastik genlerin ekspresyon seviyelerine etkileri mRNA düzeyinde belirlenmiştir. SP1 aşırı ifadesinin hücre proliferasyonunu, hücre göçünü, koloni oluşturma yeteneğini azalttığı bulunmuştur. Bu sonuçlara korele olarak SP1 shRNA ile lentiviral tabanlı kalıcı olarak ifadesinin baskılanması normoksik ve hipoksik koşullarda, hücre proliferasyonunu, hücre göçünü, koloni oluşturma yeteneğinini arttırdığı gösterilmiştir.