Cloning two tomato pathogenesis-related-1 (SlPR-1) genes and generating vectors for their heterologous expression

Dünya nüfusunun hızlı bir şekilde artması ve meydana gelen iklimsel değişiklikler, tarımsal ürün kalitesini ve verimini düşürmektedir. Bunun neden olduğu beslenme bozuklukları veya yetersiz beslenme gibi sorunlar, bitkilerin maruz kaldığı stres koşulları karşısında geliştirdikleri mekanizmaların detaylı olarak araştırılmasını elzem kılmıştır. Bu mekanizmalarla birlikte stres yanıtında görev alan genlerin tanımlanması ve karakterize edilmesi büyük önem taşımaktadır. Bitki patojen ilişkili proteinler, bitki savunma mekanizmasının temel bileşenlerinden biridir. Biyotik stres yanıtlarına ek olarak abiyotik stres koşulları altında da ifadelerinin arttığı yapılan çalışmalar ile ortaya konmuştur. Ancak, abiyotik stres unsurlarına karşı oynadıkları rollerin henüz belirlenememiş olması literatürde büyük bir eksikliğe neden olmaktadır. Bundan yola çıkarak bu tez çalışmasında, kuraklık stresi altında ifadelerinin arttığı rapor edilen SlPR-1.1 ve SlPR-1.2 genlerinin heterolog ifadelerinin belirlenmesine zemin hazırlamak için farklı vektörler hazırlanmıştır. Genlerin ayrı ayrı pIPKb004 bitki ifade vektörüne klonlanması Gateway klonlama yöntemi ile yürütülürken; iki genin birlikte pGFPGUSPlus bitki ifade vektörüne klonlanması geleneksel klonlama yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Genlerin belirlenen vektörler içindeki varlığı PCR ve kesim reaksiyonları ile doğrulanmıştır. Elde edilen bitki ifade vektörleri, belirlenen iki genin ayrı ayrı ve birlikte ifadelenmesi sonucu özellikle abiyotik stresler karşısında oluşturacakları stres yanıtlarının tespit edilmesine olanak sağlayacaktır.