İmmatür sığır oositlerinin parlak krezil mavisi (BCB) boyasıyla seçiminin embriyo gelişim oranlarına etkisi

Bu çalışmanın amacı farklı konsantrasyonlarda kullanılan PKM boyasının blastosist aşamasına kadar gelişimi destekleyecek immatür sığır oositlerin seçimindeki etkinliğini ortaya koymaktı. Tez çalışması için mezbahaneden getirilen ovaryumlar aspire edildikten sonra oositler rastgele iki guba ayrıldı. Morfolojik kriterlere göre seçilen A ve B kalite oositler kontrol grubu olarak kullanıldı. Kontrol grubundaki oositler direkt olarak maturasyon işlemine alındı. Boyama gruplarında ise oositler hiçbir kriter gözetilmeksizin boyama işlemine alındı. Parlak krezil mavisi boyası (B5388; Sigma) yıkama solüsyonu içerisinde 26, 13 ve 6,5 μM konsantrasyonlarda hazırlandı. Oositler DPBS ile 12 damlada yıkanarak PKM boyasında 90 dk inkübatörde bekletildi. Boya alan oositler (PKM+) ile boya almayan (PKM-) oositler ayrıldıktan sonra PKM+ oositler maturasyon işlemine alındı. Maturasyon %5 O₂, %5 CO₂ ve %90 N₂ içeren ortamda 21-22 saat sürede gerçekleşti. Maturasyon solüsyonundan arınan oositler IVF petrisine alındı. Fertilizasyon droplarına hazırlanan spermadan eklendi. Ardından petri 24 saat inkübatöre kaldırıldı. İn vitro fertilizasyon petrisinden alınan oositler içerisinde yıkama solüsyonu bulunan ependorflara alınarak 3 dk boyunca vortekslendi. Oositler 3 damlada kültür medyumunda yıkanarak kültür petrisine alındı. Muhtemel zigotlar 6 gün kültürde tutuldu. Fertilizasyon sonrası 4. günde zigotların klivaj oranları not edildi. Kültürün 6. ve 7. gününde ise blastosistlerin aşamaları kaydedildi. Boyama gruplarından PKM 26 цM konsantrasyonda 268 oositten 189 oositin (%70,5), 13 цM konsantrasyonda 254 oositten 193'ünün (%76) ve 6,5 цM konsantrasyonda 302 oositten 218 oositin (%72,2) boya aldığı tespit edildi. Kontrol grubunda maturasyona alınan oositlerin %97,3'ünün, boyama gruplarından PKM 26 цM konsantrasyonda %2,6'sının, 13 цM konsantrasyonda %4,1'nin, 6.5 цM konsantrasyonda ise %5'inin matür olduğu gözlemlendi. Kontrol grubunda kültüre alınan oositlerin %35,9'u blastosiste dönüşürken PKM 26 цM, 13 цM ve 6.5 цM konsantrasyonlarda ise bu oran %0 olarak tespit edildi. Sunulan çalışma sonucunda 26 μM, 13 μM ve 6.5 μM olmak üzere 3 farklı konsantrasyonda 90 dakika sürede kullanılan PKM boyası ile seçilen oositlerden blastosist üretimi yapılamamıştır. Literatürde PKM boyasının oosit seçiminde başarı ile kullanıldığı bildirilmiş olsa da toksite testleri olmayan bir kimyasal in vitro embriyo üretim prosedüründe kullanımına ihtiyatla yaklaşılmalıdır.