İmmobilize metal afinite kromatografisi ile maya alkol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması

İMMOBİLİZE METAL AFİNİTE KROMATOGRAFİSİ İLE MAYA ALKOL DEHİDROGENAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI Begüm AKDUMAN Yüksek Lisans Tezi, Kimya Anabilim Dalı Tez Danışmanı: Doç. Dr. Deniz AKTAŞ UYGUN 2013, 76 sayfa Bu tezde, poli(2-hidroksietil metakrilat-glisidilmetakrilat) [poli(HEMA-GMA)] kriyojelleri, HEMA ve fonksiyonel komonomer GMA?nın çapraz bağlayıcı olarak N,N'-metilen bisakrilamid (MBAAm) kullanılarak radikalik kriyokopolimerizasyon ile hazırlanmıştır. İminodiasedik asit (IDA) fonksiyonel grupları, poli(HEMA-GMA) kriyojellerindeki epoksi gruplarının halka yapılarının açılmasıyla kriyojellere bağlanmış ve daha sonra Zn2+ iyonları ile şelatlaştırılmıştır. Kriyojeller FTIR, SEM, EDX ve şişme çalışmaları ile karakterize edilmiştir. Bu kriyojeller 30-50 ?m büyüklüğünde birbirine bağlı gözeneklere sahiptir. Zn2+ ile şelatlaştırılmış poli(HEMA-GMA)-IDA kriyojellerinin denge şişme derecesi yaklaşık % 600?dür. Zn2+ ile şelatlaştırılmı şpoli(HEMA-GMA)-IDA kriyojelleri sulu çözeltiden alkol dehidrogenaz adsorpsiyonu için kullanılmış ve adsorpsiyon sürekli sistemde gerçekleştirilmiştir. Adsorpsiyona pH, alkol dehidrogenaz derişimi, sıcaklık, iyonik şiddet ve akış hızının etkisi araştırılmıştır. Maksimum alkol dehidrogenaz miktarı, 1,0 mg/mL alkol dehidrogenaz derişiminde ve 0,5 mL/dak akış hızındaki pH 5,0 asetat tamponunda 9,94 mg/g polimer olarak bulunmuştur. Adsorplanan alkol dehidrogenazın desorpsiyonupH 8,0 fosfat tamponunda 1,0 M NaCl içerisinde gerçekleştirilmiş ve % 93,5 olarak bulunmuştur. Ayrıca bu kriyojeller tek bir adımda mayadan alkol dehidrogenaz saflaştırılmasında kullanılmıştır. Desorbe edilen alkol dehidrogenazın saflığı gümüş ile boyanmış SDS-PAGE ile gösterilmiştir. Bu saflaştırma işlemi ham maya homojenatından alkol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması için başarılı bir şekilde kullanılabilir. Anahtar sözcükler:Alkol dehidrogenaz, maya, kriyojel, IMAK, iminodiasetik asit.