İnsan eksfoliasyon zamanı gelmiş süt dişi pulpasından elde edilen mezenkimal kök hücrenin eldesi, hücre yüzey belirteçleriyle (CD90, CD105, CD45) karakterizasyonun sağlanması ile kisspeptin ve nörokinin reseptörlerinin ((KISS1R, TACR3) gen ekspresyonlarının real time PCR (RT-PCR) ile değerlendirilmesi

Bu çalışmada "İnsan Eksfoliasyon Zamanı Gelmiş Süt Dişi Mezenkimal Kök Hücrelerinin CD90+, CD105+ CD45- Hücre Yüzey Belirteçleriyle Akım Sitometrisinde Karakterizasyonun Sağlanması, Kisspeptin ve Nörokinin Reseptörlerinin (KISS1R, TACR3) RT-PCR ile İncelenmesi" adlı yüksek lisans tez projesi olup Çukurova Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinasyon Birimi destekleri ile hazırlanmıştır. Sunulan tez çalışmasının amacı, süt dişi kök hücrelerinin kisspeptin, nörokininleri ve reseptörlerini eksprese etmeleri mevcut genlerin pubertede anahtar rol üstlenmeleri nedeniyle hipogonadizm gibi üreme sistemi hastalıkları için alternatif bir kaynak olarak kullanabileceği düşünülmüştür. Eksfoliasyon zamanı gelmiş süt dişi kök hücrelerinin, Çukurova Üniversitesi Etik Kurulu'ndan alınan izinler doğrultusunda 9 yaşındaki erkek hastadan izole edilmesi sağlanmıştır. İzole edilmesi sağlanan süt dişi kök hücrelerinin kültürlenmesine ÇÜ Biyoteknoloji Araştırma ve Uygulama Merkezi de devam edilmiştir. Akım sitometrisi analizi için pozitif (CD90 ve CD105) ve negatif (CD45) belirteçler belirlenmiştir. Süt dişi kök hücrelerinin mezenkimal kök hücre karakteri sağladıkları hücre yüzey belirteçleriyle doğrulanmıştır. Mezenkimal kök hücre karakteri taşıdıkları doğrulanan süt dişi kök hücrelerinin, pasaj 3, 4 ve 5'e ulaşması sağlanmış öncelikle her pasaj için RNA izolasyonu ardından cDNA' ya dönüşümü sağlanmıştır. Süt dişi kök hücrelerindeki genlerin (KISS1, KISS1R, TAC3 ve TACR3) ekspresyonu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile belirlenmiştir. KISS1, KISS1R ve TAC3, TACR3 gen ekspresyonları pasaj 3, 4 ve 5 için RT-PCR'da analiz edilmiş ve gen ekspresyonlarındaki değişim pasaj sayısıyla ilişkilendirilerek incelenmiştir. KISS1 geni tarafından kodlanan kisspeptin-1 ve ligandı olduğu KISS1R'nin ve KISS1-KISS1R (GPR54) sistemine etki eden TAC3-TAC3R genleri üreme sistemiyle ilişkilendirilmiştir. KISS1, KISS1R (GPR54), TAC3 ve TACR3 genlerinin hipotalamus- hipofiz- gonad aksınını etkileyerek (HHG aksı), üreme sistemindeki işleyişi kontrol etmek ve sürdürülebilir sağlanması için önemli rol üstlenmeleri üzerinde odaklanılmıştır. Üreme sistemindeki düzenleyici rolü, puberteyle olan ilişkisi ve GnRH salınımı gibi pek çok metabolik olayda görev aldığı belirlenip araştırılmıştır. KISS1, KISS1R, TAC3 ve TACR3 genlerin de meydana gelen fonksiyon kaybı, mutasyonların hipogonadizme, puberteye neden olabileceği sonucu üzerinde durulmuştur. Elde edilen bulgular, mezenkimal kök hücre karakteri taşıyan süt dişi kök hücrelerinin pasaj sayısıyla ilişkili olarak kisspeptin, nörokinin ve reseptörlerini ekspresyonlarında artış meydana geldiği belirlenmiştir. Hem üreme sisteminde görev alan bu genlerin ifadesinin olması hem de kök hücrelerin hasarlı olan dokuya nakledildiklerinde rejenerasyonu sağlamaları nedeniyle üreme sistemi hastalıklarında alternatif bir kaynak olarak kullanabileceği düşünülmüştür.