Buğday kepeği polifenol oksidazının ayrılması, kısmi saflaştırılması ve özellikleri

Buğday kepeği polifenol oksidazı katekol ve 4 -met il katekol oksidasyonunu katalizledi. Ham ekstraktta doğal olarak bulunan fenolik bileşikler sübstrat olarak işlendi ve ham ekstraktın aktivitesinin düzeltilmesi gerekti. Yüksek sübstrat konsantrasyonunda, aktiviteye karşı enzim konsantrasyonu doğrusallık gösterirken, düşük sübstrat konsantrasyonunda endojen sübstrat varlığını gösteren bir eğri elde edildi. Fenoller diyaliz, çöktürme, iyon değiştirme kromatografisi, celite'e tutunma ve PVPP ekstraksiyonu yöntemleriyle uzaklaştırılmaya çalışıldı. Celite'e tutunma ve PVPP ekstraksiyonu yöntemleri fenollerin ayrılmasına sebep oldu. PPO'nun celite'e tutunması özgül aktivitede ham ekstrakta göre 4 kat artış gösterirken PVPP ile ekstraksiyon sonunda elde edilen PPO özgül aktivitesinde 2.5 kat artış gözlendi. PPO ile katalizlenen oksidasyonun kinetiği Michaelis-Menten modeline uygun bulundu. Km ve V,^ değerleri sırası ile 21i mM ve 99 uM/dak olarak hesaplandı. Enzim; etil alkol, ditiyotreitol ve isoproterenol ile inhibe oldu ve 90 °C vısıcaklığa kadar ısı dayanıklılığı gösterdi. Enzimin optimum pH' sı 5.0 olarak bulundu. Anahtar Kelimeler: Polifenol oksidaz, buğday kepeği.