Karbapenem duyarlı olmayan klebsiella pneumoniae izolatlarının MLSt, maldı-tof, PFGE ile moleküler epidemiyolojisinin incelenmesi

Giriş ve Amaç: Bu çalışmada Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi Eğitim ve Araştırma Hastanesi'nde tedavi gören hastaların çeşitli klinik örneklerinden izole edilen karbapenem duyarlı olmayan K.pneumoniae suşlarında antibiyotik direnç genleri ile virülans genleri ve suşlar arası klonal ilişkisinin epidemiyolojik verilerle birlikte moleküler yöntemlerle araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: VITEK-2 (BioMerieux, Fransa) otomatize sistemi ile karbapenem grubu duyarlı olmayan 32 adet K. pneumoniae izolatı çalışmaya dahil edildi. Kolistin dirençli 13 adet suş kolistin sıvı mikrodilüsyon test edildi. Karbapenem dirençli suşlarda sık görülen çeşitli antibiyotik direnç genleri ve virülans genleri PCR ile tarandı. Karbapenemazların hızlı tanısında kullanılan immunokromatografik testler ile PCR sonucu uyumlulukları karşılaştırıldı. Ayrıca hastanemizden izole edilen karbapenem duyarlı olmayan K. pneumoniae suşlarının klonal ilişkisini belirlemek amacıyla PFGE, MLST ve MALDI-TOF MS yöntemleri kullanıldı. Bulgular: Tüm suşlar için en yüksek direnç TZP, CAZ, FEP ve MEM'e karşı gösterildi. En duyarlı antibiyotik olarak ise gentamisin (%78,1) olarak bulundu. Suşların 31'inin karbapenemaz genlerinden en az birini taşıdığı PCR ile gösterildi. Bir suşta ise OXA-48+NDM birlikteliği gösterildi. Direnç genlerinden en sık SHV (%84,3) olmak üzere sırayla CTX-M-1(%46,8), OXA-48(%40,6), KPC(%40,6), TEM(%31,2), NDM(%18,8) olduğu bulundu. Virülans genlerinden en sık magA(%68,7) olmak üzere sırayla kpn(%59,3) ve K2(%9,3) tespit edildi. İmmünokromatografik testler PCR sonuçları ile %100 uyumlu bulundu. VITEK-2 otomatize sistem sonuçlarına göre kolistin dirençli bulunan tüm izolatlar kolistin sıvı mikrodilüsyon ile de dirençli bulundu. PFGE ile yapılan analizde izolatların 19'unun Tenover kriterlerine göre 6 farklı küme içinde kümelendiği gösterildi, diğer izolatlar ise birbirleriyle ilişkisiz olarak saptandı. MLST analizlerinde ST101 tipi %29 oranında en yaygın ST tipi olarak belirlendi. ST101'i sırasıyla ST16, ST307, ST14, ST147, ST309, ST377, ST395 ve ST2096 tipleri takip etmektedir. MALDITOF MS ile yapılan bakteriyel tanımlamada VITEK-2 ile arasındaki uyum %94,3 olarak bulundu. Moleküler tiplendirme değerlendirme sonucu suşlar arasındaki maksimum benzerlik %70'i geçmedi. Sonuç: Ülkemizde endemik olan OXA-48'in yanı sıra, dünya genelinde daha sık görülen KPC'nin giderek yaygınlaştığı tespit edildi. İmmünokromatografik testler maliyet iii etkinliği açısından değerlendirilerek laboratuvarlarda kullanılabilir. Moleküler tiplendirmede MLST ile PFGE sonuçlarının uyumlu olduğu gösterildi. Ancak MALDITOF MS ile uyumlu bulunmadı. Moleküler tiplendirme yöntemleri arasında PFGE en iyi yöntem olarak görülmektedir. Bakteriyel tanımlamada VITEK-2, MALDI-TOF MS ve MLST arasında farklılıklar bulunmaktadır. Karbapeneme dirençli bakterilerin enfeksiyon kontrolü açısından her kurum tarafından takip edilmesi, hem tüm dünyada global bir halk sağlığı sorunu haline gelen antibiyotik direnci ile mücadele için akılcı antibiyotik kullanım politikalarına hem de enfeksiyon kontrol önlemlerine katkı sağlayacaktır. Anahtar Kelimeler: K. pneumoniae, karbapenem, PFGE, MLST, MALDI-TOF