Kolon kanseri hücrelerinde Sparstolonin B'nin toll like reseptör yolağına etkisi

Amaç: Kolorektal kanser, dünya genelinde en sık görülen malignitelerden biri olup kansere bağlı mortaliteler arasında üçüncü sırada yer almaktadır. Kolorektal kanserde Toll like reseptör 2 ve 4 (TLR2/4) ekspresyonunun artışı inflamatuar yanıtı güçlendirerek tümör gelişimini desteklemektedir. Bu çalışmada, TLR2/4 antagonisti olan Sparstolonin B (SsnB)'nin insan kolorektal kanser hücrelerinde (HCT-116) hücre canlılığı, inflamatuar sinyal yolları, apoptotik süreçler ve sfingolipid metabolizması üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Yöntem: HCT-116 ve sağlıklı fibroblast (BJ) hücrelerine SsnB (3.125-50 µM) ve/veya forbol 12-miristat 13-asetat (PMA; 1-10 nM) uygulaması yapıldı. Bu uygulamaların hücre sağkalımına etkileri, doz-zaman bağımlı olarak 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) analizi ile değerlendirildi. Hücre modellerinde SsnB'nin proliferasyona etkileri çoğalan hücre nükleer antijeni (PCNA) enzime bağlı immünosorbent test (ELISA) ve immünofloresan analiz ile değerlendirildi. Apoptoz üzerine etkileri ise parçalanmış terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP çentik uç etiketleme (TUNEL), akış sitometrisi ve kesilmiş kaspaz-3 immünofloresan analiz ile değerlendirildi. TLR sinyalizasyonu, sitokin ekspresyonu ve sfingolipid seviyeleri kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (q-RT PCR), ELISA, immünofloresan boyama ve kütle spektrometrisi (LC-MS/MS) kullanılarak ölçüldü. Bulgular: SsnB, HCT-116 hücre canlılığını doz ve zamana bağlı olarak azaltmış, BJ hücreleri üzerinde minimal etki göstermiştir. PMA uygulaması hücre proliferasyonunu arttırırken, SsnB bu etkiyi baskılamıştır. SsnB uygulanan gruplarda kesilmiş kaspaz-3 aktivasyonu ve TUNEL pozitif hücre oranı artmıştır. PMA ile uyarılan TLR2/4, MyD88, p-ERK ve pNF-κB seviyeleri SsnB ile belirgin biçimde baskılanmıştır. SsnB uygulanan gruplarda inflamatuvar sitokinlerin (TNF-α, IL-1β ve IL-6) seviyeleri azalmış, seramid (C18, C20, C22 ve C24) seviyeleri artmış ve tümör progresyonuyla ilişkili S1P ve C1P seviyeleri düşmüştür. Sonuç: SsnB, kolon kanseri hücrelerinde proliferasyonu seçici olarak inhibe eder, apoptozu indükler, TLR aracılı inflamatuar yanıtı ve sfingolipid metabolizmasını modüle eder. BJ hücrelerinde ise belirgin bir toksisite oluşturmaması, SsnB'yi kolorektal kanser tedavisinde hedefe yönelik bir terapötik ajan olarak öne çıkarmaktadır. Anahtar Kelimeler: Sparstolonin B; kolorektal kanser; apoptoz; toll like reseptör; inflamasyon; sfingolipid