Konjenital sitomegalovirüs enfeksiyonu tanısında sitomegalovirüs DNA'sının filtre kağıdında kurutulmuş idrarda polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması: Yöntem validasyonu

Amaç: Bu çalışmanın amacı ulusal tarama programına olanak sağlamak için; filtre kağıtlarına emdirilerek kurutulmuş idrar örneklerinden CMV DNA'sının saptanmasında gerçek zamanlı PZR yönteminin valide edilmesidir. Yöntem: CMV DNA pozitif örnek olarak konjenital CMV enfeksiyonu olan bir bebeğin idrarı, filtre kâğıdı olarak da Guthrie kartları kullanılmıştır. 10⁵ IU/mL CMV DNA'ya sahip idrar örneğinden yapılan seri dilüsyonlar (10⁴, 10³, 10² IU/mL) filtre kağıtlarına damlatılarak kurutulmuş ve standart laboratuvar koşullarında saklanmıştır. DNA ekstraksiyonu kurutmanın ardından belirlenen belirli günlerde (1., 2., 4., 8. ve 16. gün) yapılmış, ardından PZR analizi gerçekleştirilmiştir. Veriler karışıklık matrisi üzerinden değerlendirilmiş; doğruluk, duyarlılık, özgüllük, kesinlik ve ROC analizi hesaplanmıştır. Bulgular: Yöntem yüksek analitik performans göstermiştir. 10³, 10⁴ ve 10⁵ IU/mL konsantrasyonlarında %100 pozitiflik saptanırken, 10² IU/mL düzeyinde pozitiflik oranı düşük saptanmıştır. Testin doğruluk, duyarlılık, özgüllük ve kesinlik değerleri %100 bulunmuştur. ROC analizi ( Receiver Operating Characteristic – Alıcı İşlem Karakteristik Eğrisi) sonucunda AUC değeri (Area Under the Curve – Eğri Altındaki Alan) 1.0 olup, pozitif ve negatif grupların mükemmel şekilde ayrıldığını göstermektedir. Optimal eşik değeri 10³ IU/mL olarak belirlenmiş, farklı günlerde yapılan analizlerde sonuçların değişmemesi örneklerin yüksek stabilitesini doğrulamıştır. Sonuç: Filtre kağıtlarında kurutulmuş idrar örneklerinin PZR yöntemiyle analiz edilmesinin konjenital CMV enfeksiyonunun tanısında yüksek doğruluk ve pratiklik sunduğunu göstermektedir. Yöntem, örnek toplama, stabilite ve taşınabilirlik açısından avantaj sağlamakta olup hem laboratuvar hem saha koşullarında uygulanabilir. Ayrıca yenidoğan tarama programlarına entegre edilerek CMV'ye bağlı komplikasyonların önlenmesine katkı sağlayabilir. Anahtar Kelimeler: sitomegalovirüs (cmv), konjenital cmv tanısı, polimeraz zincir reaksiyonu (PZR), filtre kağıdında kurulmuş idrar örneği, validasyon