Engineering and systematic comparison of constitutive promoters in various lines of chinese hamster ovary cells

Son yirmi yılda, moleküler biyoteknolojideki gelişmelerin ardından, rekombinant biyoteknolojik ilaçların üretimi önemli ölçüde artmıştır. Çin hamsteri yumurtalık hücreleri endüstriyel biyoterapötiklerin üretiminde en çok tercih edilen memeli hücre ekspresyon sistemidir. Bu hücrenin avantajları süspansiyonda büyüyebilmesi, insan benzeri translasyon sonrası modifikasyonlar yapabilmesi ve iyi karakterize edilmiş transfeksiyon ve gen amplifikasyon sistemlerine sahip olmasıdır. Bu çalışmayı gerçekleştirmek amacıyla, rekombinant DNA teknolojisini kullanarak, yeni bir çift promotör raportör sistemi tasarladık. Bu sistem ile çeşitli CHO hücre hatlarında doğal viral, memeli ve endojen promotörleri en yüksek seviyede protein ekspresyonu için sistematik olarak karşılaştırıldı. İlk olarak, CHO-WT, CHO-DG44 ve CHO-DG44 süspanse hücre hatlarında promotör aday panelimizi (CMV, SV40, HSV TK, PGK, EFS, EF1a, UBC, CAG ve CHEF1a) test ettik. Lusiferaz analizi sonucunda, en yüksek raportör aktivitesini CMV promotöründe tespit ettik. Lusiferaz sonuçlarımızı, seçili dört promotörün akış sitometrisinde analiz edilmesi ile destekledik. Sonrasında, seçtiğimiz beş promotörü stabil hücre hatlarında karşılaştırmak amacıyla, DHFR içeren vektöre yerleştirdik. Stabil hücre hatlarının elde edilmesi halen devam etmektedir. Tamamlandığında, çift promotörlü sistemimiz ile güçlü beş promotörü uzun süreli hücre kültürü için karşılaştırabileceğiz. Sonuç olarak, çift promotör raportör sistemi, tipik olarak iki vektörün beraber verilmesinde görülen problemleri ortadan kaldırdı ve CHO hücrelerinde yüksek ekspresyon seviyeleri sağlayan güçlü düzenleyici elementleri tanımlamak için faydalı bir sistem olduğu kanıtlandı. Anahtar Kelimeler: CHO, rekombinant DNA teknolojisi, promotör gücü, çift promotör sistemi