Lipaz enziminin tanınmasına yönelik moleküler damgalı hidrojel hazırlanması ve karakterizasyonu

Tez çalışmasında, moleküler damgalama tekniği ile hidroksietilmetakrilat (HEMA), 1-vinilimidazol (1-VI), metil akrilat (MA), akrilamid (AAm), 2-dimetil aminoetil metakrilat (2-DMAEMA) gibi farklı fonksiyonlara sahip monomerler kullanılarak lipaz damgalı (MIP) ve damgasız (NIP) hidrojeller hazırlandı. Hazırlanan bu hidrojeller için lipaz geri bağlama çalışmaları farklı pH ortamlarında gerçekleştirildi. MIP ve NIP hidrojellerde tutunan protein miktarları ve damgalama etkinliği (IF) değerleri hesaplanarak karşılaştırıldı. AAm, AAm-1-VI, AAm-MA monomerleri ile hazırlanan hidrojellerin damgalama etkinliklerinin yüksek olduğu görüldü ve çalışmalara bu hidrojeller üzerinden devam edildi. Lipaz enziminin seçimli ayrımına yönelik hazırlanan hidrojelin yapısal karakterizasyonu Fourier Transform Infrared Spektroskopisi (FTIR) analizi ve yüzey morfolojilerinin analizi ise taramalı elektron mikroskopi (SEM) ile yapıldı. Lipaz enziminin MIP ve NIP hidrojeller üzerine geri bağlama koşullarının optimizasyonu amacıyla inkübasyon süresi, sıcaklık, enzim konsantrasyonu ve pH etkisi incelendi. MIP ve NIP hidrojeller üzerine enzimin maksimum bağlanması 25 °C, pH 3,0 ve 90 dk.'da gerçekleşti. Başlangıç enzim konsantrasyonu 5 mg/mL'ye ulaştığında adsorpsiyonun doygunluğa ulaştığı görüldü. Optimize edilen koşullarda adsorpsiyon izotermleri ve adsorpsiyon kinetikleri çalışıldı. Lipaz damgalı hidrojelin seçimliliğinin incelenmesi amacıyla geri bağlama çalışması α-amilaz, β-glukozidaz ve sığır serum albümin (BSA) ile gerçekleştirildi. MIP hidrojellerin bu enzimlere ve proteine karşı seçimliliğinin düşük olduğu görüldü. MIP ve NIP hidrojellerin şişme özelliklerini araştırmak amacıyla şişme testi uygulandı. Akrilamid monomeri ile hazırlanan lipaz damgalı hidrojel farklı pankreatik enzimleri içeren ortamdan lipazın seçimli olarak ayrılmasında kullanıldı. Örneklerin saflık kontrolü SDS-PAGE yöntemiyle yapıldı.