Lizil oksidaz enzimi saflaştırılması ve biyoteknolojik uygulamaları

Bu çalışmada, sığır aortundan lizil oksidaz (LOX) enzimi yeni bir kriyojel kolon geliştirilerek saflaştırılmıştır. Bu tez kapsamında ilk olarak metakriloil benzatriazol (Ma-Bt) temelli kompleksler sentezlenmiştir. Ardından, sentezlenen kompleksler 2-hidroksietil metakrilat (HEMA) tabanlı kriyojel kolona tutturularak LOX enzimi saflaştırılması için yeni bir kromatografik ayırım kolonu geliştirimiştir. Sentezlenen komplekslerin karakterizasyonu Fourier Taramalı Infrared (FTIR) Spektroskopisi, Nükleer Manyetik Rezonas (NMR) Spektroskopisi, kriyojel kolonun karakterizasyonu ise FTIR, Taramalı Elektron Mikroskop (SEM) analizi ve şişme testleriyle yapılmıştır. Sığır aortundan elde edilen ham ekstrakttan LOX enzimi, sentezlenen kriyojel kolonun Hızlı Protein Sıvı Kromatografisi (FPLC)'nde ayırım kolonu olarak kullanılmasıyla saflaştırılmıştır. Saflaştırılan enzimin protein içeriği Bradford yöntemiyle tayin edildikten sonra, saflaştırılan enzimin aktivitesi ve optimum aktivite koşulları belirlenmiştir. Dairesel dikroizm (CD) spektroskopisiyle, saflaştırılan enzimin ikincil ve tersiyer yapısındaki değişim izlenmiş ve enzimin saflığı SDS-PAGE analiziyle belirlenmiştir. Yapılan çalışmada, LOX enziminin kromatografik olarak saflaştırılması için etkili ve kolay uygulanabilir bir kolon dolgu materyali geliştirilmiştir. Geliştirilen yöntemle saflaştırılan LOX enziminin, laboratuvar koşullarında elastinin çapraz bağlanmasında etkili olduğu görülmüştür. Bu açıdan değerlendirildiğinde, LOX enziminin farklı biyoteknolojik uygulamalarda da kullanılabileceği öngörülmektedir.