Investigation of the effects of diethyl maleate on NLRP3 ınflammasome activation in microglial cells

Mikroglial hücreler merkezi sinir sisteminin (MSS) dokularda yaşayan makrofajlarıdır (Dubbelaar, Kracht et al. 2018). Beyinde bir akut hasar oluştuğunda, mikroglia, hücresel kalıntıları, invaze eden mikrobiyel organizmaları ve MSS'ye zararı olan diğer bileşenleri fagosite ederler. Diğer bir yandan, sitokinleri salgılamakla sorumludurlar. Bunu merkezi sinir sisteminde immün yanıta destek olarak gerçekleştirirler (Dubbelaar, Kracht et al. 2018). İnflamazom aktivasyonu, IL-1β ve IL-18 sitokinlerinin salınımına, Kaspaz-1 aktivasyonuna ve olası piroptotik hücre ölümüne yol açan inflamatuar yanıtı başlatır (Yang, Wang et al. 2019). Bu sepeble, bu gibi durumlarda inflamazom aktivasyonunun önlenmesi gerekmektedir. Anti-inflamatuar özellik gösteren birtakım kimyasallar inflamazom aktivasyonunu engellemek adına uygun adaylar olabilmektedir. Dietil Maleat bir Nrf2 indükleyicisidir ve Nrf2 yolağına bağlı olarak, DEM'in, inflamatuar sitokinlerinin salınımını ve olası hücre ölümünü inhibe edeceği öngörülmektedir. DEM'in LPS+ATP ile indüklenmiş NLRP3 inflamazom aktivasyonu kaynaklı hücre ölümünü baskıladığı hipotez edilmektedir. Bu tezde, DEM'in N9 mikroglial hücre hattında NLRP3 inflamazom aktivasyonu üzerindeki etkisi incelenmiştir. Bu amaçla, N9 hücre hattında NLRP3 inflamazom aktivasyonu LPS ve ATP ile indüklenmiştir. Hücreler, inflamazom aktivasyonu üzerindeki etkisini belirlemek adına DEM ile muamele edilmiştir. DEM'in uygulanan koşullar altında sitotoksisitesi LDH (Lactate Dehydrogenase) ve PI görüntüleme yöntemleriyle belirlenmiştir. Sonrasında, inflamazom markörleri mRNA düzeyinde PCR ile, protein düzeyinde ise Western Blotlama ve ELISA yöntemleriyle incelenmiştir. DEM ön muamelesinin NLRP3 inflamazom aktivasyonu kaynaklı inflamatuar sitokin salınımını ve hücre ölümünü baskıladığı belirlenmiştir. Anahtar kelimeler: Dietil Maleat, mikroglia, N9, inflamazom, NLRP3, piroptoz, LPS, ATP