Mycobacterium tuberculosis MMAA4 proteininin tütün bitkisinde üretilmesi

Mycobacterium tuberculosis'in neden olduğu tüberküloz (TB), günümüzde de çok sayıda insanın ölümüne yol açan aşı ile önlenebilir bir hastalıktır. BCG, TB'a karşı kullanılan tek onaylı aşıdır, ancak bu aşının yetişkinlerde ve yaşlılarda korunması yetersizdir. Yeni etkili anti-TB aşıları geliştirmek için çalışmalar devam etmektedir. Bu çalışmanın amacı, M. tuberculosis'in virülans faktörlerden biri olan ve immün yanıtı tetikleme kapasitesi gösterilen MmaA4 proteinini kodlayan geni tütün bitkilerine aktarmak ve rekombinant TB aşısının geliştirilmesi için MmaA4 antijenik proteininin tütün bitkisinde potansiyel üretimini sağlamaktır. Bu amaçla, M. tuberculosis mmaA4 geni pGFPGUS+ vektörüne klonlandı. Daha sonra pGFPGUS+mmaA4 ve kontrol grubu olarak sadece pGFPGUS+ plazmitleri Agrobacterium tumefaciens'e aktarıldı. Rekombinant A. tumefaciens hücreleri aracılığıyla tütün bitkileri transforme edildi. pGFPGUS+mmaA4 ile oluşturulan transgenik tütün bitkilerinde mmaA4 geninin varlığı PZR yöntemiyle doğrulandı. Rekombinant MmaA4 proteininin transgenik tütünlerde üretimini göstermek için SDS-PAGE ve Western blot analizleri gerçekleştirildi ancak mmaA4 genini taşıyan ve taşımayan transgenik bitkiler arasında bir fark gözlenmedi. Transgenik tütünlerde MmaA4 proteininin üretiminin görülmemesi, bakteri geninin bitkide ifade edilmesi için kodon optimizasyonu yapılmamasına bağlanmıştır.