Prolaktin hormonunun insan mezenkimal kök hücrelerinin proliferasyon ve differansiyasyon üzerine etkileri

Kök hücre uygulamalarında en önemli hususlardan birisi, hasarlı dokuya dokunun tamirine yetecek sayıda ve kalitede saf hücrelerin aktarılmasıdır. Bu nedenle, farklılaşmamış kök hücrelerin olgun hücrelere farklılaşması ve çoğalması için rekombinant veya sentetik sitokinler, büyüme faktörleri gibi biyolojik uyaranlar kilit rol oynamaktadır. Bu çalışmada, steril koşullarda temin edilmiş plasentadan, laminar kabin içinde Mezenkimal Kök Hücre elde edildi. Bu MKH'ler T75 flaska ekilip CO2 inkübatöründe 37 0C de 14 gün kültür takibi yapıldı. Bu süre sonunda tripsinizasyon işlemi gerçekleştirildi (Pasaj 0). Pasaj 0 (P0) sonrası örnekler tekrar ekildi ve 7. Günde tripsinize edildi (Pasaj 1). P1 de elde edilen hücreler ile çalışma gerçekleştirildi. Prolaktin hormonu doz belirlenmesi için 96'lık kuyuya 102 ng/L' den başlayayarak azalan dozlarda (50, 25 ,10 ,1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 ng/L) her doz için kontrollü 8 kuyuya, standart sayıda hücre ile ekim yapıldı .Aynı zamanda bir de negatif kontrol için sadece besi yeri ile (medyum) 8 kuyuya ekim yapıldı. Hücre kültürü üzerine en etkili olan Prolaktin dozunu belirlemek için yaygın olarak kullanılan enzimatik bir test olan MTT (tetrazolium tuzu 3-[4,5- dimethythiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) testi yapıldı. Sonuçlar değerlendirildiğinde, dozlar arasında belirgin bir istatistiksel fark görülmedi. Prolaktin hormonunun MKH osteojenik ve adipojenik dönüşüme etkisinin belirlenmesi için 20 ng/L prolaktin dozu ile kültür çalışması yapıldı. 20 ng/L prolaktin dozu kullanılarak sadece hormon ile , hormon ve adipojenik dönüşüm medyumu ile ve hormon ve osteojenik dönüşüm medyumu ile olmak üzere hücre kültürleri yapıldı. CO2 inkübatöründe kültür takibi yapıldı ve farklılaşma üzerine bu hormonun etkisi test edildi. Adipojenik dönüşümü test etmek amacıyla Oil Red-O, Osteojenik dönüşümü test etmek için ise Alizarin Red S boyama protokolleri uygulandı ve sonuç mikroskobik olarak değerlendirildi. Elde edilen sonuca gore, prolaktin hormonu kullanılan kültürlerde, kontrol hücre grubu ile benzer sayıda dönüşen hücre gözlenmiştir.