Proteozom inhibisyonun 4T1 meme ve B16F10 melanoma hücrelerindeki apoptotik etkilerinin araştırılması

Son zamanlarda anti-kanser çalışmalarında proteozom inhibisyonuna olan ilgi artmıştır. Proteozom inhibisyonunun bazı hücresel fonksiyonları etkilediği ve apoptozisi başlatabileceği ortaya çıkmıştır. Bu tez çalışmasında; proteozom inhibisyonunun 4T1 meme kanseri ve B16F10 melanoma hücreleri üzerinde meydana getirdiği apoptotik etkiler araştırılmıştır. Çalışmamızda, 48 saat süreyle farklı bortezomib konsantrasyonları (10 nM, 100 nM, 500 nM, 1 µM) ile muamele edilen B16F10 hücreleri; apoptoziste sıklıkla görülen hücrelerin petri kabının dibinden kalkması, küreselleşme, küçülüp büzülme, komşu hücrelerden ayrılma ve üzerine düşen ışığı daha çok yansıtma gibi morfolojik değişimlere uğramışlardır. Ayrıca, apoptozisin önemli belirteçlerinden olan DNA fragmentasyonu da gözlenmiştir. 4T1 hücrelerinde B16F10 hücrelerine göre daha yüksek konsantrasyonlarda (100 nM, 500 nM, 1 µM) apoptotik değişimler gözlenmiştir. Yine çalışmamızda; 48 saat süre ile 0.5 µM MG132 ile muamele edilen B16F10 hücrelerinde apoptotik değişimler benzer şekilde meydana gelirken, 0.5 µM MG132 ile 48 saat muamele edilen 4T1 hücrelerinde çok fazla değişim gözlenmemiştir. Ayrıca, 10 µM bortezomib ve 6 saat süreyle muamele edilen B16F10 ve 4T1 hücrelerinde Western blot yöntemiyle p53 proteini miktarı incelendiğinde; yalnız B16F10 hücrelerinde p53 artışı gözlenirken, 4T1 hücrelerinde artış görülmemiştir. Bu sonuçlar; B16F10 hücrelerinin 4T1 hücrelerine göre, proteozom inhibitörlerine karşı daha hassas olduklarını ve bu hassasiyette p53 proteininin önemli rol aldığını göstermektedir. Daha sonra yapılan deneylerde, hem 4T1 hem de B16F10 hücrelerinde kaspaz-3 enzim aktivitesinde önemli artış gözlenmiştir; fakat, bu sonuç Western blot analizleriyle doğrulanamamıştır. Western blot deneyleri proteozom inhibisyonu sonucu kaspaz 3'ün aktive olmadığını göstermiştir. Bu sonuçlar, aktivite deneylerinde görülen kaspaz-3 aktivitesindeki artışın muhtemelen diğer kaspazlardan (örneğin, kaspaz-7) kaynaklanma ihtimali olduğunu göstermektedir. Ayrıca, Western blot analizleri bortezomib ile muamele edilen 4T1 ve B16F10 hücrelerinde ubiquitin-protein konjugatları miktarının arttığını göstermiştir. Elde edilen sonuçlar; proteozom inhibisyonunun apoptozisin uyarılmasında etkili olduğunu ve kanser tedavisinde alternatif olarak kullanılabileceğini göstermektedir.