Puccinia striiformis f. sp. tritici aday patojen efektör geninin polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılması ve klonlanması

Puccinia striiformis f. sp. tritici (Pst), buğdayda sarı pas hastalığına sebep olan obligat, biotrofik bir mantardır ve dünya çapında buğdaya en fazla zarar veren patojendir. Başta Türkiye olmak üzere dünya buğday üretimi için en büyük problemlerden birini oluşturmaktadır.Bu tez çalışmasında, direnç mekanizmasında rolü olduğu düşünülen Pst?ye ait aday efektör gen PstHa12j12?nin 342 baz uzunluğunda olan kısmı sentezlettirilmiştir.Sentezletirilen gen fragmanının 180 baz uzunluğundaki bölüme özgün primerler dizayn edildi. Polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile çoğaltıldı ve susturma vektörü olan pSL039B-1 vektörüne klonlanması amaçlandı. Daha ileriki aşamada Avocet Yr10 buğday çeşidinden enzimatik yolla protoplast hücrelerinin izolasyonu amaçlandı. PZR ile PstHa12j12 gen fragmanı çoğaltımı başarıyla gerçekleşti ve transformasyon sonucu klonlar elde edildi. Sekansa gönderilen klonların analiz sonuçlarına göre klonlama işleminin başarısız oldu, Avocet Yr10?den protoplast izolasyonu gerçekleşti fakat büyümeleri için konuldukları ortamda oluşan kontaminasyondan dolayı tek bir hücreden yeni bir bitki oluşumu gerçekleştirilemedi.Anahtar Kelimeler: Buğday, Puccinia striiformis f. sp. tritici, bitki immün sistemi, klonlama, protoplast