Renal kanser hücre hattında (CAKI-2) karbonik Anhidraz-IX enzim inhibisyonunun mTOR proteini üzerine etkilerinin araştırılması

Karbonik anhidraz (CA) karbondioksit/bikarbonatın'ın (CO2/HCO3-) dönüşümünü katalizler. CA enzim ailesi içerisinde tümörle ilişkisi gösterilen izoenzimlerden biri CA-IX'dur. CA-IX'un tümörlü dokularda ekspresyonu artmaktadır ayrıca intrasellüler kuyruklarının (IC) fosforillenmesinin kanser ile ilişkili olduğu bilinmektedir. PI3K/Akt/mTOR sinyal yolağı; hücre proliferasyonu, sağkalımı ve farklılaşmasında görevli bir sinyal iletim yoludur. Bu etkilerini S6K1 ve 4EBP1 proteinlerinin aktivasyonu aracılığıyla gösterir. mTOR'un aktivitesi kanser hücrelerinde yüksektir ve en yüksek ifade edildiği kanser türlerinden biri de renal kanserlerdir. Renal kanserlerin en yaygın histolojik tipi ise berrak hücreli renal karsinomdur. Bu çalışmada amaçlanan, CA-IX inhibisyonunun, tümorogenez sürecinde etkili olduğu bilinen mTOR yolağı üzerine olan etkisini belirlemektir. Bu amaçla çalışmada CAKI-2 insan berrak hücreli renal karsinoma hücre hattı kullanılmıştır. Çalışmada kullanılan inhibitörler olan Rapamisin ve Asetazolamid'in bu hücre hatları üzerindeki etkin dozunu belirlemek için WST-1 sitotoksisite testi yapılmıştır. Hipoksik ortam oluşuturulmuş ve kontrolü Real Time PCR ve Western Blot yöntemleri ile yapılmıştır. CA-IX inhibisyonunun mTOR yolağı üzerine olan etkisini belirlemek için Western blot ve immünofloresan boyama çalışmaları yapılmıştır. Çalışmanın sonucunda AZA'nın mTOR sinyal yolağında inhibisyon etkisine neden olduğu gösterilmiştir. Ancak bu etki istatistiksel olarak anlamsız bulunmuştur (p>0.05).Bu inhibisyon etkisinin gösterilmiş olması ileriki çalışmalar için öncü nitelik taşımaktadır. Elde edilen sonuçlar kanser tedavisinde kullanılacak yeni ilaç uygulamaları için son derece önemli bir katkı sağlayabilir.