Sakarya'da yetişen iki farklı kabak çekirdeğinden (Cucurbita maxima ve moschata) katalaz enziminin karakterizasyonu

Katalaz (Hidrojen Peroksit Oksiredüktaz, E.C: 1.11.1.6), hidrojen peroksitin suya dönüşmesini sağlar ve prostetik grup olarak hem grubu içerir. Ayrıca katalaz omurgalı ve omurgasız hayvanlarda, bitkilerde ve mikroorganizmalarda mevcut olup yüksek bir turnover sayısına (4x 107 s-1) sahiptir. Katalaz önemli bir antioksidan savunma sistemi bileşeni olup, hidrojen peroksitin suya dekornposizyonunu katalizler.Bu çalışmada katalaz enzimi Sakarya'da yetiştirilen iki farklı kabak çekirdeğinden (Cucurbita maxima ve Cucurbita moschata) saflaştırılarak kinetik özellikleri incelenmiştir. Öncelikle enzim homojenatı uygun tampon çözeltileri kullanılarak elde edilimiş ve ardından amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleri uygulanmıştır.Diyalizden elde edilen protein sephadex G-100 kolon kromotogrofisi kullanılarak saflaştırılmıştır. Enzimin molekül ağırlığını belirlemek amacıyla SDS-PAGE elektroforez uygulanmıştır. Kabak çekirdeklerinden elde edilen katalaz enzimleri için hidrojen peroksit substratı kullanılarak 240 nm'de UV?Vis spektrofotometre cihazında absorbans azalmasının takibi ile Km ve Vmax değerleri elde edilmiştir. Cucurbita maxima için Km= 17,68 mM, Vmax = 81,300 EÜ / mL; Cucurbita moschata için Km = 20,029 mM, Vmax = 58,139 EÜ / mL olarak hesaplanmıştır. Enzim için optimum pH, optimum sıcaklık değerleri sırasıyla 6,8-7,0 ve 25 °C olarak bulunmuştur. Enzimlerin molekül ağırlıkları elektroforez kullanılarak hesaplanmıştır. Her iki kabak çekirdeği katalazı için 60 kDa ile 8 kDa arasında üç bant gözlemlenmiştir. Ayrıca siyanür ve azid gibi hem inhibitörlerinin enzim aktivitesini inhibe ettiği tespit edilmiş ve inhibitörlerin KI değerleri hesaplanmıştır. Her iki çekirdek içinde azit KI = 0,66 0,04 ; siyanür KI = 2,42 0,01 olarak hesaplanmştır.Anahtar kelimeler: Kabak çekirdeği, Cucurbita maxima, Cucurbita moscahata, antioksidant enzimler, katalaz, antioksidan sistemler, hidrojen peroksit.