Investigation of Nek2 kinase targets with focus on centrosome clustering

Normal hücrelerin aksine, kanser hücreleri genellikle ekstra sentrozomlara sahiptirler ve bu ekstra sentrozomlar çok kutuplu iğlerin (MPS) oluşmasına yol açar, bu da hücre ölümünü tetikler. Bununla birlikte, bu hücreler başarılı bir şekilde bölünmeyi başarır ve genomik materyalin eşitsiz ayrılmasının ölümcül sonuçlarından kaçınırlar, çünkü ekstra sentrozomlarını iki kutba birleştirirler. Nek2A, çeşitli mitotik süreçleri düzenleyen bir mitotik kinazdır. Bu çalışmada, Nek2A aktivitesinin azaltılmasının (knock-out, susturma veya özel inhibitörler kullanılarak) sentrozomların kümelendirilmesini teşvik ettiğini, aşırı ifadesinin ise ekstra sentrozomları kümesizleştirdiğini ve kanser hücrelerini hücre ölümüne karşı savunmasız hale getirdiğini gösterdik. İlginç bir şekilde, Nek2'nin sentrozomal hedefleri (CNAP1, Rootletin veya Centlein) veya genomik istikrarsızlığa neden olabilen hedefleri (TRF1 veya HEC1) kümelendirme üzerindeki etkisinden sorumlu gibi görünmedi, bu da diğer hedeflerin bu süreçte rol oynayabileceğini göstermektedir. Nek2A'nın MPS üzerindeki etkisinin yeni bir yol olup olmadığını veya bilinen diğer kümesizleştirme faktörleri ile birlikte çalışıp çalışmadığını incelemek için HSET ve NuMA'yı test ettik. Bulgularımız, HSET'in kümesizleştirme aktivitesinin NEK2A'ya ek olarak olduğunu, bağımsız bir süreci ima ettiğini gösterdi, oysa NuMA'nın bastırılması bu etkiyi tersine çevirebilirdi. Ayrıca TurboID yakınlık işaretleme analizi yaptık ve sentrozom veya mikrotübüller boyunca bulunan çeşitli potansiyel Nek2A hedeflerini ortaya çıkardık, bunlar arasında NuMA da vardı. NuMA, yakınlıkta olsa da Nek2A ile birlikte çekim yapmamıştır. İlginç bir şekilde, KIF2C'yi Nek2A'nın yeni bir etkileşim ortağı olarak tanımladık ve ardından yaptığımız analiz, onun susturulmasının Nek2A'nın sentrozom kümesi üzerindeki etkisini azalttığını gösterdi. Sonuç olarak, Nek2A'nın sentrozom kümesi üzerindeki rolü ve KIF2C gibi yeni etkileşim ortaklarının tanımlanması, kanser hücre biyolojisinin daha derinlemesine anlaşılmasının yolunu açabilir ve hedefe yönelik kanser tedavisi için yenilikçi yöntemler sunabilir.