Şevketibostan (cnicus benedictus) bitkisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, Peroksidaz (POD) enzimi Şevketibostan (Cnicus benedictus) bitkisinden saflaştırılmış ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Öncelikle, POD enzimi üçlü-faz ayırma tekniği (TPP) ile saflaştırılmış ve SDS-PAGE yöntemiyle saflık kontrolü yapılmıştır. POD enziminin molekül ağırlığı 63 kDa olarak bulunmuştur. Enzimin kinetik karakterizasyon çalışmalarında, substrat spesifikliğini belirlemek için 4-metil katekol, H2O2, o-fenilendiamin, gallik asit, kafeik asit ve pirogallol substratları kullanılmıştır. Kullanılan tüm substratlar için Michaelis-Menten (Km) sabiti ve maksimum reaksiyon hızı (Vmax) değerleri hesaplanmıştır. Enziminin karakterizasyon çalışmalarında ayrıca optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddeti, tuz toleransı ve enzimin depolanma kararlılığı incelenmiştir. Şevketibostan (Cnicus benedictus) POD enziminin optimum pH'sı 7,0 ve optimum sıcaklığı 30 oC olarak bulunmuştur. Şevketibostan POD enzimini askorbik asit, sodyum azid (NaN3), Fe+3, Fe+2, Hg+2, Sn+2, Pb+2, Cd+2, Cu+2, K+, Na+, Ca+ metalleri, DMSO, DMF, etanol, aseton ve t-butanol organik çözücüleri inhibe etmektedir.