Sığır vebası virüsü matriks geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklanması

1. ÖZET Bu çalışmanın amacı sığır vebası (SV) virüsü RBOK aşı suşu matriks (M) geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde açıklatılmasıdır. Bu amaçla, SV RBOK aşı suşu ile infekte Vero hücrelerinden toplam RNA elde edildi. Matriks DNA amplikonları tersine transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu (TT-PZR) ile oluşturuldu. Matriks genine özgü primerler kullanılarak 1038 bazlık M geni kodlama bölgesi çoğaltıldı. Daha sonra, matriks geni pTOPO XL klonlama vektöründe klonlandı. Matriks geninin varlığı PZR-tarama (PZR-T) ve enzim kesim deneyleriyle gösterildi. Elde edilen plasmid EcoRL ve Şali enzimleriyle kesilerek M geni pCI-neo açıklama vektörüne yerleştirildi. pCI-neo Matrix vektöründe M geninin varlığım teyit etmek amacıyla PZR-T ve enzim kesim deneyleri yapıldı. Oluşturulan rekombinant plazmid, pCI-neo Matrix vektörü olarak adlandırıldı. Sonrasında, rekombinant pCI-neo Matrix plazmidi Vero hücrelerine geçici olarak transfekte edildi. Matriks proteinin varlığı Vestern immunoblotlama ile gösterilerek Vero hücrelerinin anti-M antikoruyla reaksiyona giren 38 kDa'luk bir proteini açıkladığı gösterildi. Anahtar Kelimeler: Sığır vebası, matriks geni, klonlama, protein açıklanması.