Termofilik Geobacillus sp. DF20 suşundan esterazın saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, Q-Sapharose iyon değişim kromotografisi ile termofilik Geobacilillus sp. DF20 suşundan esteraz saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saflaştırılan enzim doğal PAGE' de çift bant halinde gözlendi ve substrat boyama ile bu bantların esteraz olduğu kanıtlandı. Enzim maksimum aktivitesini, substrat olarak p-nitrophenyl butirat (pNPB) kullanıldığında pH 7,0 ve 50 °C'de gösterdi. Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 0,120 mM ve 54,6 U/mg protein olarak hesaplandı. Enzimin +4oC, 50oC ve 70oC sıcaklıklarında yapılan kararlılık denemelerinde 5.saat sonunda 70oC`de aktivitesini tamamen kaybettiğini 72 saat sonunda ise +4oC'de aktivitenin %100 korunurken 50oC'deki aktivitenin azaldığı görülmüştür. pH kararlılık denemelerinde +4oC sıcaklıkta pH 5 ve pH 7'de yapılan denemelerde 5 günlük inkübasyonda enzim aktivitesinin düştüğü fakat pH 5'deki aktivitenin daha yüksek olduğu görülmüştür; optimum sıcaklık olan 50oC'de pH 5 ve pH 7'de yapılan kararlılık denemelerinde 2.gün sonunda pH 5'de hiç aktivite kalmazken pH 7'de ise aktivitenin 3.gün sonuna kadar %100 korunduğu gözlenmiştir. Bazı metal iyonu ve kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkisi ayrıca incelenmiştir.Bu çalışmadan elde edilen veriler saflaştırılan esterazın bazı çözücüler varlığında aktivite göstermesi ve bunun yanında pH ve ısıl kararlı olması onu bazı endüstriyel uygulamalarda kullanışlı olabileceğini göstermektedir.