Trombin saflaştırılması için moleküler baskılanmış mikrokriyojeller

Protein saflaştırma alanı, proteinlerin yapısal ve işlevsel özelliklerini anlamak ve hücre ve doku içerisindeki rollerini açıklayabilmek için çok gerekli bir yöntem olarak karşımıza çıkmaktadır. Günümüzde yaşam bilimlerindeki gelişmelerle birlikte protein saflaştırılması, biyoteknoloji endüstrisinde temel basamak olan protein üretimi gibi belirli uygulamalarda önemli rol oynamaktadır. Dolayısıyla protein saflaştırma alanında düşük maliyetli, kolay ve verimli saflaştırma yöntemlerine olan ihtiyaç giderek artmaktadır. Sunulan tez çalışmasında, sağlık alanında önemli bir yere sahip trombinin yüksek saflıkta, tek basamakta ve düşük maliyetli bir şekilde elde edilmesi için uygun polimerik malzemeler hazırlanmıştır. Bu amaç doğrultusunda çalışmada, seçiciliği yüksek ve tekrar kullanıma imkan sağlayan, birçok alanda bu üstün özellikleri dolayısıyla tercih edilen moleküler baskılama yöntemi kullanılmıştır. Ayrıca büyük gözenek boyutlarına sahip, esneklik, kısa difüzyon yolu, iyi biyouyumluluk ve yüksek mekanik dayanıklılık gibi eşsiz özellikleri olan mikro ölçeğinde mikrokriyojeller sentezlenmiştir. Tez çalışması kapsamında, hazırlanan bu polimerik malzemelerin söz konusu protein olan trombinin biyoayırma ve saflaştırma işlemlerindeki etkinliği araştırılmıştır. Tez çalışmasının ilk basamağında, lazer uygulaması ile mikrokriyojellerin sentezleneceği 400-650 µm aralığında farklı boyutlara sahip mikrostensil kalıplar oluşturulmuştur. Aminoasit temelli fonksiyonel monomer olan N-Metakriloil-(L)-glutamik asit sentezlenmiştir. Daha sonraki adımlarda, mikrostensil kalıplar kullanılarak farklı oranda içeriklere sahip trombin baskılanmış ve baskılanmamış mikrokriyojeller sentezlenmiştir. Mikrokriyojellerin karakterizasyon çalışmaları mikro bilgisayarlı tomografi (μCT), taramalı elektron mikroskobu (SEM), optik mikroskop, yüzey alanı ölçümleri (BET analizleri) ve şişme testi ölçümleri ile gerçekleştirilmiştir. Trombin adsorpsiyonuna etki eden pH, sıcaklık, başlangıç derişimi, iyonik şiddet, adsorpsiyon süresi gibi çeşitli parametreler taranarak adsoprsiyon-desorpsiyon ve tekrar kullanılabilirlik çalışmaları gerçekleştirilmiş olup ayrıca belirlenen yarışmacı ajanlar ile mikrokriyojellerin seçiciliği incelenmiştir. Trombinin saflığı hızlı protein sıvı kromatografisi (FPLC) yöntemi ile değerlendirilmiştir.