Türkiye endemiği çok karpelli Thermopsis turcica'dan APETALA3 ve PISTILLATA gen homologlarının klonlanması ve karakterizasyonu

Arabidopsis APETALA3 (AP3) ve PISTALATA (PI) genleri B sınıfı MADS kutulu genlerdir ve bitki çiçeklenmesinde petallerin ve stamenlerin gelişiminden sorumludur. Bu çalışmada, çok-karpelli meyve üreten sıra dışı legüm türü endemik Thermopsis turcica Tan, Vural and Küçüködük'den AP3 ve PI gen homologlarının izole edilmesi ve karakterizasyonu hedeflenmiştir. Rutin PCR, RACE analizleri, sekanslama ve biyoinformatik gibi moleküler araçlar kullanılarak hedef genlerin izolasyonları genç çiçek tomurcuklarından gerçekleştirilmiştir. T. turcica genç çiçek tomurcuğu ve yarı açılmış çiçek dokularında (sepal, petal, stamen ve karpel) TtAP3 ve TtPI genlerinin transcript seviyeleri gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyon PCR (RT-qPCR) analizi ile belirlenmiştir. TtAP3 ve TtPI genleri tam uzunluk cDNA'larının sırasıyla 681 (226 aa kodlayan) ve 546 nt (181 aa kodlayan) açık okuma çerçevesine sahip olduğu belirlenmiştir. Her iki gen MIKC-tipi MADS domainli protein kodlamaktadır. Arabidopsis gibi diğer bitkiler için belirlenmiş protein homologları ile karşılaştırıldığında, tahmin edilmiş TtAP3 protein PI motifi ve euAP3 motifi içerirken, tahmin edilmiş TtPI proteini PI motifine sahip değildir. RT-qPCR tekniği ile TtPI transkript seviyesi en çok yarı açılmış çiçeğin petal ve stamen dokularda tespit edilmiştir. Ancak, TtAP3 transkript seviyesi literatüre göre yüksek çıkması beklenen petal ve stamene göre çiçek tomurcuğu, sepal ve karpelde daha fazla olduğu belirlenmiştir. ii Yapısal ve fonksiyonel analizler T. turcica TtAP3 ve TtPI genlerinin sırasıyla Arabidopsis AP3 ve PI genlerinin homologu olduğunu göstermiştir. Differenasiyal display veya in situ hibridizasyonu analizleri aracılığı ile TtAP3 geni ifade profilinin detaylandırılması bir sonraki çalışma konusu olabilir.