Mezenkimal kök hücre koşullandirilmiş besiyerinin oksidatif stres kaynakli retina hasarindaki in vitro etkisi

Bu çalışma, hidrojen peroksit (H₂O₂) ile strese uğratılmış retinal pigment epitel (RPE) hücrelerinde adipoz ve limbal doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden (MSC) elde edilen koşullandırılmış besiyerin (CM), hücre yaşamı, hücre döngüsü, inflamasyon, otofaji ve anjiyogenez üzerine değerlendirmeleri amaçlamaktadır. Ayrıca, adipoz kökenli MSC-CM (ADMSC-CM) depolama koşullarının anti-inflamatuvar özelliklerine etkisi ve yaşa bağlı otofaji bozulmalarına karşı liyofilize edilmiş ADMSC-CM'in koruyucu etkileri incelenmiştir. MSC-CM, H₂O₂ ile stres oluşturulan RPE hücrelerine uygulanmıştır. Hücre yaşamı MTT testi ile değerlendirilmiş ve hücre döngüsü dağılımı akış sitometrisi ile analiz edilmiştir. İnflamatuvar tepkiler, temel sitokinler ve sinyal proteinleri için RT-qPCR ve Western blot ile ölçülmüştür. Anjiyogenik potansiyel, VEGF ELISA ve HUVEC göç ve yaşam testleri ile analiz edilmiştir. ADMSC-CM'nin depolama koşullarının etkileri, konsantre edilmiş ve liyofilize CM'nin inflamasyon belirteçlerine etkileri göz önüne alınarak incelenmiştir. Son olarak, liyofilize ADMSC-CM'nin otofaji mekanizmalarına karşı koruyucu rolü, RPE hücrelerinin ön tedavi edilmesi ve ardından H₂O₂'ye maruz bırakılması ile değerlendirilmiş; hücre yaşamı, LDH salınımı, ATP seviyeleri ve mitokondriyal fonksiyon analiz edilmiştir. Hem ADMSC-CM hem de LMSC-CM, H₂O₂ tedavisinden sonra RPE hücre yaşamını önemli ölçüde artırmıştır. Her iki kaynaktan elde edilmiş MSC-CM, H₂O₂ tarafından indüklenen G2/M faz durmasını hafifletmiştir. MSC-CM, inflamatuvar sitokinlerin (IL-1β, IL-6 ve IL-10) ekspresyonunu azaltmış ve p38 MAPK sinyal yolunu inhibe etmiştir. Liyofilize ADMSC-CM, konsantre edilmiş CM ile karşılaştırıldığında inflamasyon belirteçlerinde anlamlı bir azalma göstermiştir. MSC-CM, Bax/Bcl-2 oranını azaltmış ve LC3 ve p62 gibi otofaji ile ilgili proteinleri modüle etmiştir. Liyofilize ADMSC-CM ile ön tedavi, hücre yaşamını artırmış, LDH salınımını azaltmış ve ATP seviyelerini korumuştur. MSC-CM, salınan VEGF seviyelerini etkilememesine rağmen, HUVEC göçü ve yaşamı üzerinde anlamlı bir değişiklik göstermiştir. Liyofilize ADMSC-CM, mitokondriyal membran potansiyelini koruyarak oksidatif stres kaynaklı mitokondriyal hasara karşı, otofaji yolağını kullanarak, koruyucu bir rol üstlenmiştir. Özellikle adipoz dokudan elde edilen MSC-CM, H₂O₂ ile tedavi edilen RPE hücrelerinin yaşamını ve fonksiyonunu hücre döngüsü durması, enflamasyon ve otofaji mekanizmalarını modüle ederek iyileştirmektedir. Liyofilize ADMSC-CM, anti-inflamatuvar özelliklerini korumakta ve yaşa bağlı otofaji bozulmalarına karşı koruyucu etkiler göstermektedir; bu da onu oksidatif stres ve inflamasyon ile ilişkili retinal hastalıkların tedavisinde klinik uygulamalar için umut verici bir aday yapmaktadır.