Wharton jelinden izole edilen mezenkimal kök hücrelerin subklinik mastitisli ineklerdeki terapötik etkilerinin patolojik ve moleküler yöntemlerle araştırılması

Bu çalışmada, subklinik mastitisli (SM) süt ineklerinde Wharton jelinden izole edilen mezenkimal kök hücrelerin (WJ-MKH) meme içi uygulanmasının tedavi edici etkinliği, sütte somatik hücre sayımı, hematolojik parametreler, mikrobiyolojik analizler, histopatolojik ve immünohistokimyasal incelemeler ve ayrıca quantitative PCR (qPCR) ile moleküler düzeyde araştırıldı. Çalışmada aynı laktasyon dönemindeki eşit bakım ve besleme koşullarında bakılan 20 adet Holstein cinsi inek kullanıldı. SM'li hayvanları tespit etmek için California Mastitis Test (CMT) uygulandı. Hayvanlar sağlıklı kontrol (n:4, 3 ml DMEM solüsyonu, meme içi, 7 gün arayla 2 kez), WJ-MKH kontrol (n:4, 2,5 x 107 WJ-MKH, meme içi, 7 gün arayla 2 kez), SM+Antibiyotik (n:6, 3 ml meme içi DMEM solüsyonu ve Seftiofur, 1mg/kg/IM 7 gün arayla 2 kez) SM+WJMKH (n:6, 2,5 x 107 WJ-MKH, meme içi 7 gün arayla 2 kez) olmak üzere 4 gruba ayrıldı. Çalışmanın 1, 8, 15, 20 ve 30. günlerinde hemogram tayini için aseptik koşullar altında vena jugularis'ten doğrudan antikoagülan içeren EDTA'lı tüplere venöz kan örnekleri ve moleküler analizler için karyotüplere süt örnekleri alındı. Histopatolojik ve immünohistokimyasal (PCNA) incelemeleri için çalışmanın 30. gününde meme dokularından alınan biyopsi örneklerinin %10'luk formaldehit solüsyonunda tespitinin ardından rutin doku takibi yapıldı. Hemogram analizlerinde RBC, HGB, HCT, MCV, MCH ve MCHC, Lym%, Neu% ve PLT parametrelerinin referans aralıkları içinde değişiklik gösterdiği tespit edildi. WJ-MKH uygulamasının bağışıklık yanıtı dengeleyerek, çalışmanın 15. gününde referans aralığı üzerinde olan WBC değerini çalışma sonunda normal sınırlara yakınlaştırdığı belirlendi. SM'nin meme dokusunda yol açtığı histopatolojik bulguların şiddetinin WJ-MKH tedavisi ile önemli oranda azaltıldığı tespit edildi (p<0,05). İHK boyamada PCNA ekspresyon seviyesi WJ-MKH tedavi grubunda antibiyotik tedavi grubuna göre daha yüksek seviyede eksprese edildiği saptandı (p<0,05). Süt örneklerinden yapılan qPCR analiz sonuçlarına göre ACTA2 ve EGF ekspresyon seviyelerinde anlamlı farklılık gözlenmezken, çalışma başında yüksek olan DEFB1, TLR2 ve çalışma başlangıcında düşük olan VEGFA ekspresyon seviyelerinin her iki tedavi grubunda da çalışma sonunda kontrol grubu değerlerine yakın değerler gösterdiği belirlendi. Ayrıca, SM'li hayvanlarda WJ-MKH uygulamasının ve GMCSF ekspresyon seviyelerini kademeli olarak başarıyla düşürdüğü saptandı. SM tedavisinde, WJMKH tedavisinin en az antibiyotik tedavisine benzer düzeyde etkinlik gösterdiği belirlendi. Ayrıca kök hücrelerin, immünmodülatör etkileri aracılığıyla inflamatuar yanıtı düzenleyebileceği, epitel hücre proliferasyonunu artırarak ve doku rejenerasyonunu destekleyerek hasarlı meme dokusunun iyileşme sürecine katkı sağlayabileceği sonucuna varıldı.