Enzim-dekstran konjugatları

Enzimler tıpta, biyoteknoloji ve endüstrinin çesitli alanlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu uygulama alanlarında, enzimlerin sıcaklıga, pH'ya ve diger çevre kosullarına karsı dirençli olması istenmektedir. Dogal ve sentetik makromoleküllerin enzimler ile olusturdugu konjugatlar tıpta ve biyoteknolojinin çesitli dallarında kapsamlı uygulama alanları bulmaktadır. Bu çalısmada yüksek sıcaklıga, yüksek ve düsük pH'lardaki ortamlara dirençli Horseradish Peroksidaz-Dekstran ve Glukoz Oksidaz-Dekstran kovalent konjugatları sentezlendi. Elde edilen enzim-polimer konjugatları dört dedektörlü HPLC sisteminde (GPC) ve FTIR spektroskopisi yöntemiyle incelendi. Sentezlenen konjugatların ve saflastırılan enzimlerin farklı sıcaklıklardaki su banyosunda, 0, 15, 30 ve 60 dakika bekleme süreleri sonunda pH 7'de aktiviteleri tayin edildi. Tüm bekleme sürelerinde HRP-Dekstran konjugatlarının aktivitelerinde, artan sıcaklıga karsı saf enzime göre daha yavas bir düsme gözlendi. Özellikle 1/10 oranlı konjugat sıcaklıga karsı oldukça iyi direnç gösterdi. Benzer durum GOD-Dekstran konjugatlarında da geçerli oldu ve özellikle 1/5 oranlı konjugatın yüksek sıcaklıklarda saf enzime oranla daha iyi aktivite gösterdigi izlendi. 1/10 oranlı HRP-Dekstran ve 1/5 oranlı GOD-Dekstran konjugatlarının farklı pH ve sıcaklıklarda aktiviteleri tayin edildi. Saf enzimin aktivitesinde pH'ya baglı keskin degismeler meydana gelirken, konjugat pH degismesine karsı daha stabil kaldı. Yüksek sıcaklıkta (70oC) saf enzimin aktivitesini kaybettigi pH degerlerinde, 1/5 oranlı GOD-Dekstran konjugatının aktivite gösterdigi belirlendi. Ayrıca, HRP-Dekstran(nHRP/nD=1/10; Mw 75.000) ve GODDekstran( nGOD/nD:1/5; Mw 75.000 ve nGOD/nD:1/1; Mw 188.000) konjugatlarının oda sıcaklıgında ve 4oC'de tayin edilen raf ömürlerinin, satın alınan ve saflastırılan enzimlerden daha iyi oldugu görüldü. Anahtar kelimeler: ?Horseradish? peroksidaz (Armoracia rusticana), glukoz oksidaz, dekstran aldehit, conA, HRP-dekstran konjugatları, GOD-dekstran konjugatları, aktivite, raf ömrü, GPC, FTIR.