Escherichia coli, Klebsiella ve Acinetobacter suşlarında plazmit veya kromozomal kaynaklı genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz varlığının araştırılması ve moleküler yönden incelenmesi

Bu çalışmada Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarına başvuran hastalara ait çeşitli kültür örneklerinden izole edilen toplam 94 suş incelenmiştir. Suşların %53,2'si Escherichia coli, %20,2'si Acinetobacter baumanniii, %18,1'i Klebsiella pneumoniae, %4,3'ü Klebsiella oxytoca, %2,1'i Klebsiella terrigena, %2,1'i ise Klebsiella ornithinolytica olarak adlandırılmıştır. Suşlardaki genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz (GSBL) varlığı çift disk sinerji testi (ÇDST) ile tespit edilmiştir. ÇDST sonucunda suşların %69'unun GSBL enzimi ürettiği, %31'inin ise üretmediği saptanmıştır. Suşların plazmit DNA'ları izole edilmiştir. 71 izolatta plazmit DNA tespit edilmiş, 23 izolatta ise plazmit DNA'ya rastlanmamıştır. İzolatların 0,4 kb ile 19,3 kb arasında değişen büyüklüklerde 1?10 adet plazmit DNA taşıdıkları belirlenmiştir. Plazmit taşıyan GSBL pozitif 58 izolat akridin oranj (AO) çözeltisi (mg/ml) ile muamele edilmiş ve tekrar plazmit DNA izolasyonuna alınmıştır. AO uygulanan suşların %81'inde plazmit DNA bantlarının AO uygulanmayanlara göre daha ince olduğu görülmüştür. ÇDST sonucunda AO uygulanan izolatların %6,9'unda antibiyotik direncinin azaldığı saptanmıştır. Bu nedenle suşların %6,9'unda GSBL üretiminin plazmit kaynaklı olabileceği düşünülmüştür. Geriye kalan suşlarda (%93,1) GSBL yapımının plazmit kaynaklı olmadığı belirlenmiştir. Bu durumun AO'nun tüm suşların plazmitlerini gideremediğinden kaynaklandığı düşünülmektedir. İzolatların GSBL enzim tiplendirilmesi için TEM, SHV, CTX-M ve OXA primerleri tasarlanmış ve bu primerler kullanılarak Polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile hedef diziler çoğaltılmıştır. PZR ürünlerinin dizi analizleri yapılarak DNA gen veritabanında BLAST yazılımı ile karşılaştırılmaları yapılmış ve buna göre suşların %50'sinde TEM, %14,87'sinde SHV, %11,7'sinde CTX-M tipi GSBL olduğu tespit edilmiştir. %23,43'ünde GSBL tiplerine rastlanmamıştır. PZR'de ÇDST'de tespit edilemeyen iki izolatın GSBL pozitif olduğu bulunmuştur.