Hepatit C virusunun "core" proteinin prokaryotik hücrede ifade ettirilip saflaştırılması

Hepatit C virusu (HCV) zarflı, tek iplikli bir RNA virusudur. Dünya Saglık Örgütünün tahminlerine göre dünyada 170 milyon kisinin HCV ile infekte oldugu tahmin edilmektedir. HCV ciddi morbidite ve mortalitesi yanı sıra, tedavi maliyetlerinin yüksekligi ile de önemli bir saglık sorunudur. HCV poliproteininden kodlanan ilk protein özyapı (core) proteinidir. Bu protein virusun yapısına katılması dısında, hücresel islevleri de virus lehine düzenleyebildigi gözlenmistir. Bu nedenle bu proteinin virusun patogenezinde rol aldıgı düsünülmektedir. Çalısmada, özyapı proteinin ilk 178 aminoasidini kodlayan DNA dizisi PZT ile çogaltıldı. PZT ürünü önce pGEM-T Easy TA vektörüne klonlandı. Ardından bu vektörden BamHI ve HindIII ile kesilip pQE-30'a klonlandı. Ekspresyon, E. coli M15 (prep4) susunda OD600=0.7'de 1mM IPTG ile uyarılarak 3 saat süre ile yapıldı ve bakteriler santrifüj ile pellet haline getirip 8M ürede çözündü. Protein saflastırılması afinite kromotografisi (Ni-NTA matriks) ile yapıldı. Ekspresyon ve saflastırılmıs protein, ?Western Blot? ile ECL substrat kullanılarak saptandı. Ekspresyon ve saflastırma sonrasında beklenen 21kDa'luk bant büyüklügü elde edildi. Çalısmada, özyapı proteinin ilk 178 aminoasidi E. coli'de eksprese edilmistir. Bu saflastırılmıs protein patogenez çalısmalarında, serolojik test hazırlanmasında kullanılabilecektir. Ayrıca klonlanan vektörler PZT'de pozitif kontrol olarak kullanılabilir. Bu çalısmada ile elde edilen bilgiler, gelecekte yapılacak prokayotik ekpresyon çalısmaları için zemin olusturacaktır.