Katalaz enziminin Phanerochaete Chrysosporium dan izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Katalaz, hücre ve dokuların hidrojen peroksidin toksik etkilerinden korunmasında temel rol oynayan antioksidan enzimlerden biridir.Çalışma kapsamında, yüzde 60 amonyum sülfat çöktürmesi, yüzde 60 etanol çöktürmesi, DEAE selüloz anyon değiştirici kromatografisi ve son saflaştırma basamağı olarak da sephacryl- s-200 jel filtrasyon kromatografisi uygulanarak beyaz çürükçül fungus Phanerochaete chrysosporium katalazı 129,10 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılmış katalazın moleküler ağırlığı jel filtrasyonu ile yaklaşık 290 kDa olarak bulunmuştur. SDS-PAGE jel elektroforezi saflaştırılmış enzimin 72 kDa ağırlığında dört eşdeğer subunitten oluştuğunu göstermiştir. Saflaştırılmış enzimin optimum pH değeri 7,5 ve optimum sıcaklığı 30 derece olarak bulunmuştur. Enzim bazik bölgede daha stabil olup 60 derece 2 saat sonunda yaklaşık yüzde 25 aktivite kaybına uğramıştır. Saflaştırılmış katalaz için Km ve Vmax değerleri sırasıyla 290,69 mM ve 250000 U/mg olarak bulunmuştur. İmazalil ve procymidon fungusitleri saflaştırılmış katalaz aktivitesini inhibisyona uğratmazken benomil fungusitinin yarışmasız inhibitör etkisine sahip olduğu belirlenmiş ve Ki değeri 1,158 mM olarak bulunmuştur.