Kordon kanı türevli NK hücrelerinin, CRISPR-Cas9 tekniğiyle CD-47 knock-out edilmiş küçük hücre dışı akciğer kanseri hücreleri üzerindeki immünoterapötik etkisinin araştırılması

İmmün gözetim sisteminden kaçış yollarından bir tanesi NK (Doğal Öldürücü) hücre aktivasyonunun azaltılarak kanser hücrelerinin immün sistem tarafından tanınmasını engellemektir. Spesifik olarak bu kaçışta önemli olan sinyallerden bir tanesi SIRP-α (Sinyal Regülatör protein-α/) /CD47 (Cluster of Differentiation-47) etkileşimidir. Kanser hücreleri CD47 ifadesini arttırarak immün sistem hücrelerindeki SIRPα ile sinaptik bir etkileşim gösterip bağışıklık taramasından kaçmaktadır. Buradan yola çıkarak bu çalışmada, küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerindeki (A549) CD47'nin CRISPR/Cas9 tekniğiyle susturularak SIRPα/CD47 eksenine blokaj uygulanıp kanser hücrelerinin açık hedef haline getirilerek, NK hücreleri tarafından tanınırlığının arttırılması hedeflenmiştir. Bu hedefe ulaşma için bu tez çalışmasında ilk olarak kordon kanından NK hücre izolasyonu ve kültürü yapılmıştır. Sonrasında ise tümör hücreleri üzerindeki immün kaçış ligandı olan ve küçük hücre dışı akciğer kanseri hücreleri (A549) üzerinde ifade edilen CD47'nin CRISPR/Cas9 tekniği ile susturulmuştur. CD47 geni susturulan küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerinin (A549) SIRPα ile etkileşiminin engellenmesi ve "beni yeme" sinyalizasyonuna blokaj uygulanması hedeflenmiştir. Elde edilen bulgulardan hareketle; artan efektör NK hücre oranların, hedef A549 hücreleri ile 24 ve 48 saat ko-kültüre edilmesi neticesinde gruplar arasında hücre canlılığı açısından anlamlı bir fark (p<0.0001) gözlenmiştir. Ayrıca CD47'in susturulmasının sonucu olarak NK hücrelerinin, küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerine (A549) karşı doz-bağımlı bir etki göstererek belirgin sitotoksik etki ortaya koymuştur. Çalışma sonucunda, SIRPα/CD47 ekseninin blokajı yolu ile kordon kanı kaynaklı NK hücrelerinin, genetik olarak modifiye edilmiş (CD47-/-) küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisinin yüksek olduğu gözlemlenmiş ve kordon kaynaklı NK hücre hücrelerinin immünoterapötik bir araç olabileceği öngörüsü ortaya çıkmıştır.